产品信息

产品简介

本试剂盒采用改良的SDS-碱裂解法，优化的裂解液可以使得离心Bind DNA Mini Column在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA，结合先进的硅胶膜吸附技术，可达到快速纯化质粒DNA的目的。适用于从1-5 mL的细菌培养物中提取多至35 μg高纯度的质粒DNA。本试剂盒可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。溶液包含指示剂，通过其颜色的变化，指示重悬、裂解、中和是否完全，从而保证质粒提取的质量，实现可视化的操作流程。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于酶切、YCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译等。

储存与运输

RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输及储存；有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

1. 使用前请先检查Buffer BL、Buffer S2、Buffer S3、Buffer PD是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热数分钟，即可恢复澄清。

2. Buffer S1在使用前先加入全部的RNase A并混匀，置于2-8℃保存。

3. Buffer YW使用前请先检查是否加入指定量的无水乙醇。

4. 柱平衡步骤中Buffer BL的加入能够改善Bind DNA Mini Column的吸附能力并提高Bind DNA Mini Column的均一性和稳定性，消除高温、潮湿或其他不良环境因素对Bind DNA Mini Column造成的影响。

操作步骤

1. 柱平衡：向Bind DNA Mini Column中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g离心1 min，弃掉Collection Tube中的废液，将Bind DNA Mini Column重新放回Collection Tube中（请使用当天处理过的柱子）；

2. 细菌收集：取1-5 mL过夜培养的新鲜菌液加入离心管中，10,000 g离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）；

3. 重悬：向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μL溶液Buffer S1（使用前请先检查瓶中是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底重悬菌体沉淀，混匀后的溶液为浑浊的红色，室温静置5 min（注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低）；

4. 裂解：向离心管中加入250 μL溶液Buffer S2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解（注意：温和混合，不要剧烈震荡；此时菌液应变得清亮粘稠，如果未变清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。添加Buffer S2彻底混匀后，溶液颜色为澄清的紫色；如紫色中混杂有浑浊的红色，则说明裂解不充分，继续混匀直至溶液颜色完全变为澄清的紫色；裂解建议室温不超过5 min）；

5. 中和：向离心管中加入350 μL溶液Buffer S3，立即快速地上下颠倒混匀6-8次，充分混匀，此时将出现絮状沉淀，13,000 g离心10-15 min（注意：加入溶液Buffer S3后应立即混合，上清中含有少量微小白色沉淀对后续实验没有影响；如上清中存在大量微小白色沉淀，可再次离心后取上清；添加Buffer S3彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，如在黄色中混有紫色，则说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色）；将收集的上清液转移至Bind DNA Mini Column中，注意尽量不要吸取沉淀，10,000 g离心1 min，弃去Collection Tube中的废液，将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中；

6. 向Bind DNA Mini Column中加入500 μL溶液Buffer PD，10,000 g离心1 min，倒掉Collection Tube中的废液，将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中；

7. 向Bind DNA Mini Column中加入700 μL溶液Buffer YW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），10,000 g离心1 min，倒掉Collection Tube中的废液，将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中（注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议Buffer YW加入后静置2-5 min再离心）；

8. 重复操作步骤7；

9. 10,000 g离心2 min，尽量除去残留的液体，将Bind DNA Mini Column放入一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，开盖室温放置5 min（注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、YCR等实验）；

10. 向吸附中的膜中间位置悬空滴加50-100 μL Elution Buffer或Nuclease-free Water（60-65℃预热Elution Buffer或Nuclease-free Water后再使用效果更好），室温放置2 min，10,000 g离心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脱液的体积不应少于50 μL，体积过少会影响回收的效率。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心Bind DNA Mini Column中，室温放置2 min，10,000 g离心2 min，将DNA溶液收集到离心管中。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响。若后续做测序，建议使用Nuclease-free Water做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解）。

注意事项

1. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10 mL过夜培养物，同时按照比例增加Buffer S1、BufferS2、BufferS3的用量，Elution Buffer应在60-65℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以提取效率。其它步骤相同。

2. 各溶液使用后请及时将盖子拧紧，防止溶剂挥发。

3. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）