磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒（预封装48T）
- 48 T
磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒，适用于从新鲜或超低温冻存的简单植物样本（如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片等）提取高质量基因组DNA，提取的DNA后续可用于YCR扩增，Southern杂交，文库构建，测序等实验，搭配一科Y-48核酸提取仪提取DNA，结果显示：提取的基因组DNA完整性、得率、纯度较好。
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒（预封装48T） | Y3763-48T | 48T |
产品简介
本产品为48T规格预封装板。
分离后的基因组DNA下游应用：
1. YCR扩增
2. Southern杂交
3. 文库构建
4. 测序
特点：
1. 搭配servicebio Y-16、Y-48全自动核酸提取仪进行高通量基因组DNA提取。
2. 可替代多步离心步骤。
3. 无需有机溶剂。
4. 48个样本同时提取可在1h内完成。
样本类型与样本量：
50-100 mg新鲜或超低温冻存的简单植物样本（如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片等）
产量：
样本 | 得率 |
小麦叶片（新鲜） | 20-25 µg/50 mg |
本氏烟草叶片（新鲜） | 4-8 µg/50 mg |
拟南芥叶片（新鲜） | 4-10 µg/50 mg |
玉米叶片（新鲜） | 20-26 µg/50 mg |
水稻叶片（新鲜） | 5-8 µg/50 mg |
红花叶片（新鲜） | 2-4 µg/50 mg |
油菜叶片（新鲜） | 6-9 µg/50 mg |
陆地棉叶片（新鲜） | 8-11 µg/50 mg |
番茄叶片（新鲜） | 4-6 µg/50 mg |
上海青叶片（-80℃冻存） | 5-10 µg/50 mg |
油麦菜叶片（-80℃冻存） | 6-10 µg/50 mg |
储存与运输
RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其他试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。
组成
Component Number | Component | G3752-48T |
Y3763-1 | Buffer PGL1 | 15 mL |
Y3763-2 | Buffer PGL2 | 5 mL |
Y3763-3 | RNase A | 1 mL |
Y3763-4 | 96孔预封装板 | 3块 |
Y3763-5 | 8孔磁棒套 | 6条 |
说明书 | 1份 | |
使用前准备
1. 检查预封装板是否漏液，如果出现此现象，请勿使用。
2. 使用前观察磁珠或试剂是否粘在封口膜或预封装板孔壁上，如有此现象可上下混匀后短暂离心或于桌面上轻轻敲击预封装板底部至液滴掉落后再使用。
3. Buffer PGL1如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。
操作步骤
1. 植物组织样本裂解：
a. 裂解液＋研磨仪研磨裂解：提前向2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐YT-200-M）中加入250 μL Buffer PGL1与20 μL RNase A，再加入3-4颗3 mm的研磨钢珠（推荐Y0114-200G），取新鲜或超低温冻存的植物组织50-100 mg（叶片样本剪碎至0.5 cm2，根和茎剪碎至米粒大小），迅速转移至研磨管中，将研磨管置于研磨仪（推荐YWE-3D）中进行研磨（推荐研磨程序：频率70 HZ，每次30 s，研磨15次，每次间隔5 s），直至研磨成匀浆状（如果组织没有被彻底匀浆，会影响DNA的得率和质量）。待充分研磨后，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。
b. 液氮＋研钵研磨裂解：取新鲜或超低温冻存的植物组织50-100 mg（叶片样本剪碎至0.5 cm2，根和茎剪碎至米粒大小），迅速转移到用液氮预冷的研钵中，加入液氮，用研磨杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响DNA的得率和质量）。将研磨成粉末的样本加入到含有250 μL Buffer PGL1的1.5 mL Nuclease-free离心管中混匀，再加入20 µL RNase A，颠倒混匀，65℃水浴15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。
2. 向离心管中加入50 μL Buffer PGL2，充分颠倒混匀，冰上放置5 min；
3. 12,000 rpm，4℃离心5 min，将上清转移至一新的1.5 mL离心管中（如果取得的上清中仍存在有漂浮物，需要再次12,000 rpm，4℃离心5 min，将上清转移至另一新的1.5mL离心管中）；
4. 预封装板准备：取出预封装板，于孔板离心机500 rpm离心1 min或于桌面上轻轻敲击预封装板底部至液滴掉落后再小心撕去封口膜；
5. 将第3步的溶液全部转移至预封装板的第1列和第7列孔位；
6. 将预封装板置于核酸提取仪相应的板位上；
7. servicebio Y-16、Y-48全自动核酸提取仪参数设置：
步骤 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
工位 | 3 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 3 |
等待时间 | 00:00:00 | 00:00:00 | 00:00:00 | 00:00:00 | 00:00:00 | 00:05:00 | 00:00:00 |
混合模式a | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
混合时间 | 00:00:10 | 00:05:00 | 00:01:00 | 00:01:00 | 00:01:00 | 00:05:00 | 00:00:10 |
是否暂停 | Ⓧ | Ⓧ | Ⓧ | Ⓧ | Ⓧ | Ⓧ | Ⓧ |
吸磁时间a | 00:01:00 | 00:01:00 | 00:01:00 | 00:01:00 | 00:01:00 | 00:01:00 | 00:00:00 |
体积（µL） | 600 | 1000 | 500 | 600 | 600 | 80 | 600 |
温度（℃）b | --- | 25.0℃ | --- | --- | --- | 25.0℃ | --- |
a：如果不使用servicebio Y-16、Y-48全自动核酸提取仪，可根据其他适配本产品的仪器说明书调整吸磁时间和混合模式参数。
b：将96孔预封装板第5列和第11列孔位加热至65℃有利于提高洗脱效率。
8. 安装磁套，运行程序；
9. 自动化提取步骤完成后，将第5列和第11列孔位中的核酸溶液小心转移至新的Nuclease-free离心管中，并于-20℃长期保存。
注意事项
1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。
2. 请勿将预封装板倒置。
3. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响DNA洗脱效率。
4. 实验时穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用Nuclease-free的吸头和离心管避免交叉污染。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
实验案例：
1. 使用Y3763-磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒（预封装48T）搭配servicebio Y-48核酸提取仪分别提取小麦叶片（50 mg）、本氏烟草（25 mg）、拟南芥（25 mg）、红花（50 mg）、油菜（50 mg）、陆地棉（50 mg）6种植物叶片基因组DNA，每种植物进行8个通道同时提取，结果显示（图1、表1）：提取的基因组DNA完整性、得率、纯度较好以及核酸提取仪每个通道重复性较好。
图1：提取6种植物叶片基因组DNA后进行电泳检测。
表1：提取6种植物叶片基因组DNA后进行用Nanodrop one检测浓度与纯度
物种 | 样品 名称 | 得率 （µg/80 µL) | A260/A280 | 物种 | 样品 名称 | 得率 （µg/80 µL) | A260/A280 | |||||||
小麦 （50mg） | 样品1 | 24.01 | 1.799 | 红花 | 样品1 | 2.84 | 1.778 | |||||||
样品2 | 25.71 | 1.795 | 样品2 | 2.85 | 1.792 | |||||||||
样品3 | 27.44 | 1.802 | 样品3 | 2.87 | 1.842 | |||||||||
样品4 | 25.36 | 1.804 | 样品4 | 2.60 | 1.785 | |||||||||
样品5 | 23.77 | 1.819 | 样品5 | 3.41 | 1.782 | |||||||||
样品6 | 25.93 | 1.802 | 样品6 | 3.28 | 1.817 | |||||||||
样品7 | 26.43 | 1.81 | 样品7 | 3.79 | 1.869 | |||||||||
样品8 | 22.32 | 1.799 | 样品8 | 2.93 | 1.818 | |||||||||
本氏烟草 | 样品1 | 2.91 | 1.899 | 油菜 （50mg） | 样品1 | 8.68 | 1.755 | |||||||
样品2 | 3.47 | 1.757 | 样品2 | 8.51 | 1.753 | |||||||||
样品3 | 3.378 | 1.731 | 样品3 | 7.77 | 1.759 | |||||||||
样品4 | 3.62 | 1.712 | 样品4 | 7.01 | 1.711 | |||||||||
样品5 | 4.18 | 1.748 | 样品5 | 8.76 | 1.714 | |||||||||
样品6 | 2.93 | 1.854 | 样品6 | 相关产品服务推荐
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