产品信息

产品简介
 

本试剂盒设计用于专门从多种富含多糖、多酚等复杂的植物组织样本或真菌样本中安全、快速、高效地提取高纯度基因组DNA。本产品通过精心优化的裂解缓冲体系不仅可以对植物组织样本进行直接研磨和裂解，还可以有效的去除植物组织样本中的多糖、多酚及蛋白质等杂质，整个操作过程可以在1小时内完成，提取得到的高纯度基因组DNA可用于后续的YCR反应、酶切反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种常规分子生物学实验。

储存与运输
 

RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成
 

1. 超低温冻存的植物样本避免反复冻融，否则会导致提取的DNA质量与产量下降。

2. Buffer PGLA如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

3. 使用前请向Buffer GB中加入28 mL异丙醇，混匀后使用。

4. 使用前请向Buffer GD中加入18 mL无水乙醇，向Buffer YW中加入56 mL无水乙醇，混匀后使用。

5. 植物组织样本的起始量对基因组DNA的提取效果有很大影响。若起始量过多，基因组DNA的提取质量与相对收量都会有所降低，若样本太大，导致研磨不充分，也会影响基因组DNA质量与得率。在实验开始之前，请参考下表Table 1中植物组织样本不同起始量对应的Buffer PGLA和Buffer PGLB的适宜使用量以及样本剪切大小。

Table 1植物组织样本不同起始量对应的Buffer PGLA和Buffer PGLB的使用量以及样本剪切大小

操作步骤

1. 植物组织样本裂解：

a. 提前向2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐YT-200-M）中加入Table 1中推荐使用量的Buffer PGL A，再加入3-4颗4 mm的研磨钢珠（推荐Y0115-200G），取表1中推荐量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小），迅速转移研磨管中，将研磨管置于研磨仪（推荐YWE-3D）中进行研磨（推荐研磨程序：频率70HZ，每次30s，研磨15-20次，每次间隔5s，如果是种子等比较难研磨的样本，可以将研磨次数增加至30或者更多），直至研磨成匀浆状（如果组织未被彻底匀浆，会影响DNA得率和质量）。待充分研磨后，加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

b. 取Table 1中推荐的使用量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小）迅速转移到装有3-4颗4 mm的研磨钢珠（推荐Y0115-200G）并用液氮预冷的2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐YT-200-M）中，将研磨管置于研磨仪（推荐YWE-3D）中（放置研磨管前将适配器于液氮中迅速预冷）进行研磨（推荐研磨程序：频率70HZ，每次30s，研磨15-20次，每次间隔5s，如果是种子等比较难研磨的样本，可以将研磨次数增加至30或者更多），直至研磨成粉末状（如果组织没有被完全研磨成粉末状，会影响DNA得率和质量）。加入Table 1中推荐使用量的Buffer PGLA，再次置于研磨仪中研磨1 min。待充分研磨后，加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

c. 取新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小），迅速转移到用液氮预冷的研钵中，加入液氮，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响DNA的收率和质量）。然后将研磨成粉末的样本（Table 1中推荐的使用量）加入到含有适量的Buffer PGLA（Table 1中推荐的使用量）的1.5 mL Nuclease-free离心管中，再加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

1. 取Table 1中推荐的使用量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小），迅速转移到用液氮预冷的1.5 mL Nuclease-free离心管中，加入液氮，用一次性研杵棒研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响DNA的收率和质量）。然后向离心管中加入Table 1中推荐使用量的Buffer PGLA，再加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

2. 向离心管中加入Table 1中推荐使用量的Buffer PGLB，迅速颠倒混匀，冰上放置5 min；

3. 12,000 rpm 4℃离心5 min，将上清转移至一新的1.5 mL离心管中（如果取得的上清中仍存在有漂浮物，需要再次12,000 rpm4℃离心2 min，将上清转移至另一新的1.5 mL离心管中）；

4. 向离心管中加入与上清液等体积的Buffer GB，上下颠倒混匀；

5. 并将上述混合液转移至DNA Spin Column中。每次加入量不超过600 µL，如果超过600 µL可分批加入；

6. 12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液。将DNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

7. 向DNA Spin Column中加入500 μL Buffer GD，12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液；

8. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer YW（请沿管壁加入Buffer YW，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm室温离心1 min，弃掉废液；

9. 重复操作步骤8；

10. 将DNA Spin Column放入Collection Tube中，12,000 rpm离心2 min，除去残留的液体；

11. 将DNA Spin Column置于一新的1.5 mL的离心管中，室温放置3-5 min，使DNA Spin Column残留的乙醇完全挥发；

12. 向DNA Spin Column的膜中央加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，室温放置5 min（将Buffer TE或Nuclease-free Water加热至65℃有利于提高洗脱效率）；

13. 12,000 rpm室温离心2 min，收集DNA。若要得到更高浓度的DNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至DNA Spin Column中，室温静置5 min，12,000 rpm室温离心2 min，再次收集DNA。

注意事项

1. 应尽量使用新鲜幼嫩的植物样本，以确保提取的基因组DNA的得率与完整性。

2. 提取的基因组DNA若要长期保存，请用Buffer TE洗脱，并于-80℃保存。

3. 得到的基因组DNA避免多次反复冻融。

4. 若裂解液非常粘稠，建议减少样本起始量或增加裂解液用量。

5. 对于水分含量较多的样本，可以适当增加样本起始量。

附表：
 

本试剂盒对多种植物，真菌样本基因组DNA提取量见下表，基因组DNA的提取量和样本类型、部位以及生长状态有关，下表仅供参考。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）