产品信息

产品简介

本真菌基因组DNA提取试剂盒专为从真菌样本（如香菇、平菇等食用菌）中高效提取高质量基因组DNA而设计。采用独特的裂解缓冲体系和特异与DNA结合的膜技术，能够快速、简便地从50-200 mg新鲜或10-50 mg干燥真菌样本中提取高质量基因组DNA。本试剂盒可以在1 h内完成基因组DNA的提取，提取得到的基因组DNA可用于后续的YCR反应、酶切反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种常规分子生物学实验。

储存与运输

RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

1. Buffer FGL1如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 使用前请向Buffer GB中加入36 mL异丙醇，混匀后使用。

3. 使用前请向Buffer GD中加入21 mL无水乙醇，向Buffer YW中加入56 mL无水乙醇，混匀后使用。

4. 真菌样本起始量对基因组DNA的提取效果有很大影响。在实验开始之前，请参考下表Table 1中真菌样本不同起始量对应的Buffer FGL1和Buffer FG2的适宜使用量。

Table 1真菌样本不同起始量对应的Buffer FGL1和Buffer FG2的适宜使用量

操作步骤

1. 样本裂解：

a. 新鲜样本（裂解液＋研磨仪研磨裂解）（推荐）：提前向2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐YT-200-M）中加入Table 1中推荐使用量的Buffer FGL1，再加入3-4颗4 mm的研磨钢珠（推荐Y0115-200G），取新鲜真菌样本50-200 mg（提前切碎至0.5 cm³大小），迅速转移至研磨管中，将研磨管置于研磨仪（推荐YWE-FP）中进行研磨（推荐研磨程序：频率70 HZ，每次30 s，研磨10-15次，每次间隔5 s，如果是比较难研磨的样本可以增加研磨次数），直至研磨成匀浆状（如果样本没有被彻底匀浆，会影响DNA的得率和质量）。待充分研磨后，加入20 μL RNase A，涡旋混匀。。

b. 新鲜样本（液氮＋研钵研磨裂解）：取新鲜真菌样本50-200 mg（提前切碎至0.5 cm³大小），迅速转移到用液氮预冷的研钵中，加入液氮，用研杵研磨样本，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响DNA的得率和质量）。将研磨成粉末的样本加入到含有Table 1中推荐使用量的Buffer FGL1的2.0 mL Nuclease-free离心管中混匀，再加入20 μL RNase A，涡旋混匀。

c. 干燥样本（液氮＋研钵研磨裂解）（推荐）：取干燥真菌样本10-50 mg（提前切碎至0.5 cm³大小），迅速转移到用液氮预冷的研钵中，加入液氮，用研杵研磨样本，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响DNA的得率和质量）。然后将研磨成粉末的样本加入到含有800 μL Buffer FGL1的2.0 mL Nuclease-free离心管中混匀，再加入20 μL RNase A，涡旋混匀。

d. 干燥样本（裂解液＋研磨仪研磨裂解）：提前向2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐YT-200-M）中加入800 μL Buffer FGL1，再加入3-4颗4 mm的研磨钢珠（推荐Y0115-200G），取干燥真菌样本10-50 mg（提前切碎至0.5 cm³大小），迅速转移至研磨管中，将研磨管置于研磨仪（推荐YWE-FP）中进行研磨（推荐研磨程序：频率70 HZ，每次30 s，研磨20-30次，每次间隔5 s，如果是比较难研磨的样本可以增加研磨次数），直至研磨成匀浆状（如果样本没有被彻底匀浆，会影响DNA的得率和质量）。待充分研磨后，加入20 μL RNase A，涡旋混匀。

2. 向离心管中加入Table 1中推荐使用量的Buffer FG2，迅速涡旋混匀，冰上放置5 min；

3. 12,000 rpm，4℃离心5 min，将上清液转移至一新的2.0 mL离心管中（如果取得的上清中仍存在有漂浮物，需要再次12,000 rpm，4℃离心3 min，将上清液转移至另一新的2.0 mL离心管中）；

4. 向离心管中加入与上清液等体积的Buffer GB，上下颠倒混匀；

5. 将上述混合液转移至DNA Spin Column中（每次加入量不超过600 µL，如果超过600 µL可分批加入），12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液；

6. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer GD，12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液；

7. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer YW（请沿管壁加入Buffer YW，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm室温离心1 min，弃掉废液；

8. 重复操作步骤7；

9. 将DNA Spin Column放入Collection Tube中，12,000 rpm室温离心2 min，除去残留的液体；

10. 将DNA Spin Column置于一新的1.5 mL的离心管中，室温放置3-5 min，使DNA Spin Column残留的乙醇完全挥发；

11. 向DNA Spin Column的膜中央加入50-80 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，室温放置5 min（将Buffer TE或Nuclease-free Water加热至65℃有利于提高洗脱效率）；

12. 12,000 rpm室温离心2 min，收集DNA。若要得到更高浓度的DNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至DNA Spin Column中，室温静置5 min，12,000 rpm室温离心2 min，再次收集DNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本说明书。

2. 干燥样本尽可能选择烘干样本，烘干温度为60℃。

3. 提取的基因组DNA若要长期保存，请用Buffer TE洗脱，并于-80℃保存。

4. 得到的基因组DNA避免多次反复冻融。

5. 若研磨后的裂解液非常粘稠，建议减少样本起始量或增加Buffer FGL1用量。

6. 对于水分含量较多的新鲜样本，可以适当增加样本起始量。

附表：

本试剂盒对多种真菌样本基因组DNA提取量见下表，基因组DNA的提取量和样本类型、取样部位以及生长状态有关，下表仅供参考。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）