产品信息

产品简介

本试剂盒通过特别优化的细菌裂解缓冲体系，再搭配专一结合DNA的离心吸附柱，可快速提取与纯化细菌基因组DNA。本试剂盒适用于各种革兰氏阴性菌基因组DNA的提取，以及采用溶菌酶与裂解缓冲体系结合的方法，可提取大部分革兰氏阳性菌的基因组DNA。获得的基因组DNA具有高纯度和高完整度的特性，可直接用于后续YCR扩增、Southern杂交、文库构建等多种分子生物学实验。

储存与运输

Lysozyme，Proteinase K，RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

1. Buffer BGL1如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 使用前请向Buffer YPD中加入18 mL无水乙醇，向Buffer YW中加入56 mL无水乙醇。

操作步骤

1. 取1-5 mL过夜培养的新鲜菌液加入1.5 mL离心管中，12,000 rpm离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。注意：对于革兰氏阳性菌，收集完菌体后需加入溶菌酶溶液进行破壁处理，具体方法为：加入130 µL Lysozyme Buffer，50 µL Lysozyme，涡旋振荡至菌体彻底悬浮，37℃水浴60 min，每10 min颠倒混匀一次；

2. 向离心管中加入200 μL Buffer BGL1，涡旋振荡混匀；

3. 向离心管中加入20 μL Proteinase K和10 μL RNase A，使用移液器吹打或涡旋振荡混匀后于56℃孵育20 min，此时溶液呈现透明状（如果此时溶液未透明，应延长反应时间至30 min，每10 min用移液器吹打混匀一次）；

4. 向离心管中加入200 μL Buffer BGL2和200 μL无水乙醇，上下颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀；
5. 将上述混合液转移至DNA Spin Column中，12,000 rpm离心30 s，弃掉废液，将DNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

6. 向DNA Spin Column中加入500 μL Buffer YPD，12,000 rpm离心30 s，弃掉废液；

7. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer YW（请沿管壁加入Buffer YW，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm离心30 s，弃掉废液；

8. 重复操作步骤7；

9. 将DNA Spin Column放入Collection Tube中，12,000 rpm离心2 min，尽量除去残留的液体；

10. 将DNA Spin Column置于一新的1.5 mL的离心管中，室温放置5-10 min，使DNA Spin Column残留的乙醇完全挥发；

11. 向DNA Spin Column的膜中央加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，室温放置5 min（将Buffer TE或Nuclease-free Water加热至65℃有利于提高洗脱效率）；

12. 12,000 rpm离心2 min，收集DNA。若要得到更高浓度的DNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至DNA Spin Column中，室温静置5 min，12,000 rpm离心2 min，再次收集DNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 应尽量使用新鲜的菌体，以确保提取得到的基因组DNA的得率与完整性。

3. 提取的菌体起始量切勿太多，且要充分裂解，否则可能影响基因组DNA的得率与纯度。

4. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）