产品信息

产品简介

本试剂盒通过特别优化的细菌裂解缓冲体系，可快速释放细菌基因组DNA，再结合本公司专门针对核酸提取研发的超顺磁性磁珠，在结合液的作用下选择性吸附裂解液中的基因组DNA，通过漂洗液的清洗除去磁珠吸附的少量杂质，在洗脱液的作用下释放吸附的基因组DNA。本试剂盒适用于各种革兰氏阴性菌和大部分革兰氏阳性菌。获得的高纯度、高完整度的基因组DNA可直接用于后续YCR扩增、Southern杂交、文库构建等多种分子生物学实验。

储存与运输

Lysozyme，Proteinase K，RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

1. Buffer MB1如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 使用前请向Buffer MBP中加入18 mL无水乙醇，向Buffer YW中加入56 mL无水乙醇。

3. 自备磁力架。

操作步骤

1. 取1-5 mL过夜培养的新鲜菌液于1.5 mL离心管中，12,000 rpm离心1 min，尽量吸除上清。注意：对于革兰氏阳性菌，收集完菌体后需加入溶菌酶溶液进行破壁处理，具体方法为：加入130 µL Lysozyme Buffer和20 µL Lysozyme，涡旋振荡至菌体彻底悬浮，37℃水浴60 min，每10 min颠倒混匀一次；

2. 向离心管中加入200 μL Buffer MB1，涡旋振荡混匀；

3. 向离心管中加入20 μL Proteinase K和10 μL RNase A，使用移液器吹打或涡旋振荡混匀后于56℃孵育20 min，此时溶液呈现透明状（如果此时溶液未透明，应延长反应时间至30 min，每10 min混匀一次）；

4. 向离心管中加入200 μL Buffer MB2和200 μL无水乙醇，上下颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀；

5. 向离心管中加入20 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需充分振荡至分散均匀），使用移液器吹打至磁珠分散均匀；

6. 室温静置10 min，放置过程中，使用移液器吹打混匀数次，保持磁珠处于悬浮状态；

7. 将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；

8. 加入500 μL Buffer MBP，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；

9. 加入600 μL Buffer YW，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；

10. 重复步骤9；

11. 将离心管盖打开，室温放置5-10 min，使乙醇完全挥发（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）；

12. 移去磁力架，向离心管中加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温静置5 min；

13. 将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至Nuclease-free离心管中，即得高纯度的基因组DNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 应尽量使用新鲜的菌体，以确保提取得到的基因组DNA的得率与完整性。

3. 提取的菌体起始量切勿太多，且要充分裂解，否则可能影响基因组DNA的得率与纯度。

4. 磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻。

5. 磁珠易沉降，使用前应充分振荡使其保持均匀悬浮状态。

6. 向样本中加入磁珠前，需要将样本中的试剂混合均匀。

7. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响DNA洗脱效率。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）