产品信息

产品简介

本试剂盒通过特别优化的裂解缓冲液，释放组织细胞中的基因组DNA，再通过专一结合DNA的离心吸附柱纯化基因组DNA，适用于动物组织、培养细胞以及全血基因组DNA提取。可从2-30 mg的动物组织、10⁶-10⁷新鲜培养的细胞悬液以及5-100 μL无核或有核红细胞全血（含抗凝剂），快速提取纯化10-30 μg高纯度完整的基因组DNA，获得的基因组DNA可直接用于后续YCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

储存与运输

Proteinase K和RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

1. Buffer GA如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 使用前请向Buffer PD加入18 mL的无水乙醇，向Buffer YW中加入56 mL的无水乙醇。

操作步骤

1. 样本处理：

a. 取新鲜或超低温冻存的动物组织2-30 mg，置于装有2-3颗3 mm研磨珠（推荐Y0214-150G）的1.5 mL离心管或专用研磨管中，加入200 μL Buffer GA，使用组织研磨仪（推荐YWE-3D）在常温条件下将组织彻底研磨至匀浆状（如果组织没有被彻底匀浆，将会影响DNA的得率和质量）；

b. 取10⁶-10⁷细胞悬液，于1.5 mL离心管中，1,000 rpm离心5 min，使用移液器轻轻吸弃上清，向离心管中加入200 μL Buffer GA，使用涡旋振荡器涡旋混匀；

c. 取50-100 μL无核红细胞全血（含抗凝剂），于1.5 mL离心管中，补加Buffer GA至200 μL，使用涡旋振荡器涡旋混匀（如果处理更大体积的血液，在样本中加入3倍体积红细胞裂解液（推荐Y2026）颠倒混匀，室温放置5 min，期间颠倒混匀2-3次，3,000 rpm离心10 min，使用移液器轻轻吸弃上清，留下白细胞沉淀，然后加入200 μL Buffer GA，使用涡旋振荡器涡旋混匀）；

d. 取5-20 μL有核红细胞全血（含抗凝剂），置于1.5 mL离心管中，补加Buffer GA至200 μL，使用涡旋振荡器涡旋混匀；

2. 加入20 μL Proteinase K和4 μL RNase A，56℃孵育30 min（每10 min涡旋混匀一次，可加速组织裂解），较难裂解的材料可以适当延长裂解时间；

3. 12,000 rpm离心2 min，将组织上清液转移至Nuclease-free离心管中，尽量避免吸取沉淀（如提取细胞/血液样本基因组时，请忽略此步骤）；

4. 向离心管中加入200 μL Buffer GB，上下颠倒混匀，70℃放置10 min；

5. 向离心管中加入200 μL无水乙醇，上下颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，12,000 rpm室温离心2 min；

6. 将上述上清液转移至DNA Spin Column中，12,000 rpm离心30 s，弃掉滤液，将DNA Spin Column重新放回Collection Tube中

7. 向DNA Spin Column中加入500 μL Buffer PD，12,000 rpm离心30 s，弃掉废液；

8. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer YW（请沿管壁加入Buffer YW，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm离心30 s，弃掉废液；

9. 重复步骤8；

10. 将DNA Spin Column放入Collection Tube中，12,000 rpm离心2 min；

11. 将DNA Spin Column置于一新的Nuclease-free 1.5 mL的离心管中，室温放置3-5 min，使DNA Spin Column残留的乙醇完全挥发；

12. 向DNA Spin Column的膜中央加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，室温放置5 min（将Buffer TE或Nuclease-free Water加热至65℃有利于提高洗脱效率）；

13. 12,000 rpm离心2 min，收集DNA。若要得到更高浓度的DNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至DNA Spin Column中，室温静置5 min，12,000 rpm离心2 min，再次收集DNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 应尽量使用新鲜的实验材料，以确保提取的基因组DNA不被降解。

3. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA产量下降。

4. 组织材料切勿超过最大起始量，且要充分裂解，否则可能影响得率，甚至会堵塞吸附柱。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）