磁珠法组织/细胞/血液基因组DNA提取试剂盒
- 50 T
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
磁珠法组织/细胞/血液基因组DNA提取试剂盒 | Y3615-50T | 50T |
产品简介
本试剂盒通过特别优化的裂解缓冲液，释放组织/细胞/血液中的基因组DNA，再通过超顺磁性磁珠在结合液的作用下选择性吸附裂解液中的基因组DNA，经过漂洗液的清洗除去磁珠吸附的少量杂质，在洗脱液的作用下释放吸附的基因组DNA，即获得高质量基因组DNA。本产品适用于动物组织、培养细胞以及全血基因组DNA提取。可从2-30 mg动物组织、106-107新鲜培养的细胞悬液以及5-100 μL无核或有核红细胞全血（含抗凝剂）中快速提取高纯度完整的基因组DNA，获得的基因组DNA可直接用于后续YCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。
储存与运输
Proteinase K和RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。
组成
Component Number | Component | Y3615-50T |
Y3615-1 | Buffer GA | 12 mL |
Y3615-2 | Proteinase K | 1 mL |
Y3615-3 | RNase A | 200 μL |
Y3615-4 | Buffer GB | 12 mL |
Y3615-5 | SweMag Beads | 1 mL |
Y3615-6 | Buffer PD | 12 mL（使用前加入18 mL无水乙醇） |
Y3615-7 | Buffer YW | 24 mL（使用前加入56 mL无水乙醇） |
Y3615-8 | Buffer TE | 10 mL |
说明书 | 1份 | |
使用前须知（请仔细阅读）
1. 自备磁力架、无水乙醇。
2. Buffer GA如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。
3. 使用前请向Buffer PD加入18 mL无水乙醇，向Buffer YW中加入56 mL无水乙醇。
操作步骤
1. 样本处理：
a. 取新鲜或超低温冻存的动物组织2-30 mg，置于装有2-3颗3 mm研磨珠（推荐Y0214-150G）的1.5 mL离心管或专用研磨管中，加入200 μL Buffer GA，使用组织研磨仪（推荐YWE-3D）在常温条件下将组织彻底研磨至匀浆状（如果组织没有被彻底匀浆，将会影响DNA的得率和质量）；
b. 取106-107细胞悬液，置于1.5 mL离心管中，1,000 rpm离心5 min，使用移液器轻轻吸弃上清。向离心管中加入200 μL Buffer GA，使用涡旋振荡器涡旋混匀；
c. 取50-100 μL无核红细胞全血（含抗凝剂）于1.5 mL离心管中，补加Buffer GA至200 μL，使用涡旋振荡器涡旋混匀（如果处理更大体积的血液，在样本中加入3倍体积红细胞裂解液（推荐Y2026）颠倒混匀，室温放置5 min，期间颠倒混匀2-3次，3,000 rpm离心10 min，使用移液器轻轻吸弃上清，请勿吸取白细胞沉淀，加入200 μL Buffer GA，使用移液器吹打混匀）；
d. 取5-20 μL有核红细胞全血（含抗凝剂），置于1.5 mL离心管中，补加Buffer GA至200 μL，使用移液器吹打混匀；
2. 加入20 μL Proteinase K和4 μL RNase A，56℃孵育30 min（每10 min混匀一次，可加速组织裂解），较难裂解的材料可以适当延长裂解时间；
3. 12,000 rpm离心2 min，将组织上清液转移至Nuclease-free离心管中，尽量避免吸取沉淀（提取细胞/血液样本基因组时，请忽略此步骤）；
4. 向离心管中加入200 μL Buffer GB，颠倒混匀，70℃放置10 min；
5. 向离心管中加入200 μL无水乙醇，颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，12,000 rpm离心2 min，将上清液转移至Nuclease-free离心管中，尽量避免吸取沉淀；
6. 向装有上清液的离心管中加入20 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需充分振荡至分散均匀），使用移液器吹打至磁珠分散均匀；
7. 室温静置10 min，放置过程中，使用移液器吹打混匀2-3次，保持磁珠处于悬浮状态；
8. 将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；
9. 加入500 μL Buffer PD，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；
10. 加入600 μL Buffer YW，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；
11. 重复步骤10；
12. 将离心管盖打开，室温放置5-10 min，使乙醇完全挥发（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）；
13. 移去磁力架，向离心管中加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温静置5 min；
14. 将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的Nuclease-free 1.5 mL离心管中，即得高纯度的DNA。
注意事项
1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。
2. 应尽量使用新鲜的实验材料，以确保提取的基因组DNA不被降解。
3. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA产量下降。
4. 组织材料切勿超过最大起始量，且要充分裂解，否则可能影响得率。
5. 磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻；磁珠易沉降，使用前应充分振荡使其保持均匀悬浮状态。
6. 向样本中加入磁珠前，需要将样本中的试剂混合均匀。
7. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响DNA洗脱效率。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
附操作流程简图
（产品包装升级中，以实物为准。）
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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