产品信息

产品简介

脱氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）是一类降解DNA和RNA分子的水解酶，广泛存在于环境、试剂（如酶）和生物材料（如YCR反应管）中，核酸酶的微量残留可使大量的核酸降解，对下游生物实验造成一定的影响。因此，对生物实验室的试剂、耗材和容器定期做核酸酶残留检测非常有必要。

本试剂盒是一种基于荧光探针的高灵敏度DNase快速检测试剂盒。本试剂盒中包含一种独特的DNA修饰底物（DNase Substrate），该底物的两端分别带有荧光基团和淬灭基团，荧光基团的激发/发射波长为575/602，正常情况下由于荧光基团和淬灭基团距离比较接近，底物只能发出微弱的荧光；当有DNase存在时，荧光基团和淬灭基团之间的键被切断，在激发光波下可产生大量的荧光信号，全程在30 min内完成。由于DNA底物的荧光会随着DNase活性的增加而增加，因此可对使用荧光计监测得到的结果进行动力学评估。

本试剂盒提供了DNaseⅠ作为检测体系的阳性对照，DNaseⅠ的最低检出量为5×10^-4U。除了DNaseⅠ，本试剂盒还可以检测多种其他的DNase，如Benzonase、Micrococcal Nuclease、Mung Bean Nuclease、S1 Nuclease、Exonuclease Ⅲ等。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存；有效期12个月。

组成

使用前准备

1. 96孔黑色酶标板（Nuclease-free）。

2. Nuclease-free移液器、吸头。

操作步骤

1. 配制反应体系前准备：

a) 稀释一系列DNaseⅠ浓度梯度制作标准曲线：用Nuclease-free Water将DNaseⅠ（1 U/μL）稀释为：0.00005 U/µL、0.0005 U/µL、0.005 U/µL、0.05 U/µL，不加DNaseⅠ作为阴性对照，分别取10 µL加入到96孔酶标板中，最终DNaseⅠ的量为0、0.0005 U、0.005 U、0.05 U、0.5 U；

b) 样品制备：如果待检样品为液体，可直接使用；如果待检样品为固体，取样后，需浸泡于Nuclease-free Water中制备成液体样品备用；

2. 参照下表配制反应体系：

配制反应体系时，请按照下表将试剂盒对应组分加入到96孔板。

a. DNase Substrate可放在最后加入反应体系中，避免被提前降解；若检测的核酸酶为Zn²⁺依赖，如Mung Bean Nuclease、S1 Nuclease等，向反应体系中另加入1 μL 100 mM ZnSO₄。

3. 检测：将反应体系振荡或轻轻吹打混匀，确保充分混匀后立即使用酶标仪检测，设置酶标仪检测温度为37℃（如果酶标仪没有温度设置，可进行室温检测，此时酶活可能偏低），激发/发射波长为575/602，连续检测30 min，时间间隔为2 min（检测时间可根据DNase含量进行调整，含量较低时可延长酶标仪检测时间至60 min，时间间隔为5 min）。

4. 根据DNaseⅠ的标准曲线计算出样品中残留的DNaseⅠ量。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 反应体系的配制需要在冰上操作，避免DNase Substrate被提前降解。

3. 为确保检出的准确性，请至少配制两个复孔。

4. 使用Nuclease-free Water稀释DNase I做标准曲线时需要现配现用。

5. 如果不是检测样品中DNase I的残留情况，可不用制作DNase I的标准曲线。

6. 反应液配制过程应全程在冰上进行。

7. DNase Substrate需避光，配制反应液时应避免强光照射。

8. 反应液的配制、分装请使用Nuclease-free吸头，尽量避免样品间交叉污染。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）