产品信息

产品简介

本试剂盒采用独特的Bind DNA Mini Column，既能从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段，又能用于直接纯化YCR产物，满足多种实验需要。Buffer GL中含有pH指示剂，可根据颜色来判断溶胶或YCR产物回收是否达到最佳状态。使用本产品可回收100 bp-10 kb大小的DNA片段，回收率可达85%。每个Bind DNA Mini Column每次可吸附的DNA量为20 μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、YCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

储存与运输

常温运输；常温保存，有效期12个月。

组成

操作步骤

一、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段

1. 柱平衡：向Bind DNA Mini Column中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g离心1 min，弃掉Collection Tube中的废液，将Bind DNA Mini Column重新放回Collection Tube中(请使用当天处理过的柱子)；

2. 用干净刀片将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量；

3. 向胶块中加入等倍体积溶液Buffer GL（如凝胶重为0.1 g，其体积可视为100 µL，则加入100 µL溶液Buffer GL），60℃水浴至胶块完全溶解（其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解，若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）（注意：若是对于回收产量要求高，可在加入Buffer GL完全溶胶后再加入1/2胶块体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为Bind DNA Mini Column在室温时结合DNA的能力较强。凝胶完全融解后应呈现淡黄色，即可进行后续操作。如果胶完全融解后溶液的颜色为紫色或红色，请使用10 µL 3M乙酸钠（pH 5.0）将溶液的颜色调为淡黄色后再进行后续操作）；

4. 将上一步所得溶液全部转入Bind DNA Mini Column中，10,000 g离心1 min，弃去Collection Tube中废液，将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中（注意：Bind DNA Mini Column容积为800 μL，若样品体积大于800 μL可分批加入）；

5. 向Bind DNA Mini Column中加入700 μL溶液Buffer YW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），10,000 g离心1 min，弃掉Collection Tube中废液，将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中（注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议Buffer YW加入后静置2-5 min再离心）；

6. 重复操作步骤5；

7. 10,000 g离心2 min，尽量除去残留液体。将Bind DNA Mini Column放入一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，室温放置5 min，彻底晾干（注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续酶切、YCR等实验）；

8. 向吸附膜中间位置悬空滴加30~50 μL Elution Buffer或Nuclease-free Water（Elution Buffer或Nuclease-free Water 60-65℃预热效果更好），室温放置2 min，10,000 g离心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脱液的体积不应少于30 μL，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响。若后续做测序，需使用Nuclease-free Water做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心Bind DNA Mini Column中，室温放置2 min，10,000 g离心2 min，将DNA溶液收集到离心管中）。

二、从YCR反应液或酶切反应液中回收DNA片段

1. 柱平衡：向Bind DNA Mini Column中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g离心1 min，弃掉Collection Tube中的废液，将Bind DNA Mini Column重新放回Collection Tube中(请使用当天处理过的柱子)；

2. 向YCR反应液或酶切反应液中加入3倍体积的溶液Buffer GL（加入Buffer GL不少于150 μL），充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）（注意：若是对于回收产量要求高，可在加入Buffer GL后再加入3/4 YCR反应液或酶切反应液的体积的异丙醇以提高回收率；混合后溶液应呈现淡黄色，即可进行后续操作。如果混合后溶液的颜色为紫色或红色，请使用10 µL 3M乙酸钠（pH 5.0）将溶液的颜色调为淡黄色后再进行后续操作）；

3. 将上一步所得溶液全部转入Bind DNA Mini Column中，10,000 g离心1 min，弃去Collection Tube中废液，将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中（注意：Bind DNA Mini Column容积为800 μL，若样品体积大于800 μL可分批加入）；

4. 向Bind DNA Mini Column中加入700 μL溶液Buffer YW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），10,000 g离心1 min，弃去Collection Tube中废液，将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中（注意：如回收DNA是用于盐敏感实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议Buffer YW加入后静置2-5 min再离心）；

5. 重复操作步骤4；

6. 10,000 g离心2 min，尽量除去残留液体，将Bind DNA Mini Column放入一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，室温放置5 min，彻底晾干（注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续酶切、YCR等实验）；

7. 向吸附膜中间位置悬空滴加30~50 μL Elution Buffer或Nuclease-free Water（Elution Buffer或Nuclease-free Water 60-65℃预热效果更好），室温放置2 min，然后10,000 g离心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脱液的体积不应少于30 μL，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响。若后续做测序，需使用Nuclease-free Water做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心Bind DNA Mini Column中，室温放置2 min，10,000 g离心2 min，将DNA溶液收集到离心管中）。

注意事项

1. 使用前请先检查Buffer YW是否加入指定量的无水乙醇。
2. 各溶液使用后请及时将盖子拧紧。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）