SweScript RT II First Strand cDNA Synthesis Kit (With gDNA Remover)
- 50 rxns
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
SweScript RT II First Strand cDNA Synthesis Kit (With gDNA Remover) | Y3344-50 | 50 rxns |
Y3344-100 | 100 rxns |
产品简介
本产品利用改造后的突变体逆转录酶以总RNA或mRNA为模板，高效逆转录合成第一链cDNA，试剂盒中包含合成高质量第一链cDNA所需的全部试剂，并提供两种cDNA合成引物供选择：Random Hexamer Primer和Oligo (dT)18 Primer，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续YCR或qYCR反应。SweScript RT II (Reverse Transcriptase)是基于M-MLV Reverse Transcriptase并通过体外进化筛选获得的突变体逆转录酶，SweScript RT II无RNase H活性，避免了第一链cDNA合成反应中DNA/RNA杂交体模板中RNA被降解，从而保证第一链cDNA合成量和长度；与野生型酶及第一代SweScript RT I相比，第二代SweScript RT II的热稳定性和cDNA合成效率进一步提高，可在42-65℃范围内高效合成cDNA，并且最快5 min可完成逆转录反应，特别适用于复杂结构的RNA逆转录。
本试剂盒中同时提供gDNA Remover试剂，可在逆转录步骤前快速去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，提高实验结果的可信度，并可简化qYCR引物设计，无需跨外显子设计引物。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。
组成
Component Number | Component | Y3344-50 | Y3344-100 |
Y3344-1 | SweScript RT II Enzyme Mixa | 50 μL | 100 μL |
Y3344-2 | 5×Reaction Bufferb | 200 μL | 400 μL |
Y3344-3 | Oligo (dT)18 Primer (100 μM) | 50 μL | 100 μL |
Y3344-4 | Random Hexamer Primer (100 μM) | 50 μL | 100 μL |
Y3344-5 | gDNA Remover | 50 μL | 100 μL |
Y3344-6 | 10×gDNA Remover Buffer | 50 μL | 100 μL |
Y3344-7 | Nuclease-Free Water | 1 mL | 1 mL |
说明书 | 1份 | 1份 | |
a：含有RNase Inhibitor；
b：含有dNTP Mixture和Mg2+。
操作步骤
1. 基因组去除
(1) 将RNA模板，Nuclease-Free Water置于冰上融解备用；
(2) 配制基因组去除反应体系(推荐10 μL)：
Component | Volume |
10×gDNA Remover Buffer | 1 μL |
gDNA Remover | 1 μL |
Total RNA/mRNA | 0.1 ng-5 μg/10 pg-0.5 μg |
Nuclease-Free Water | Add to 10 μL |
(3) 轻轻混匀并离心；
(4) 37℃孵育2 min后置于冰上备用；
2. 第一链cDNA合成
(1) 逆转录反应体系配制（推荐20 μL反应体系）：
Component | Volume |
基因组去除反应液 | 10 μL |
5×Reaction Buffer | 4 μL |
Oligo (dT)18 Primer (100 μM) | 1 μL |
or Random Hexamer Primer (100 μM) | or 1 μL |
or Gene Specific Primer (2 μM) | or 1 μL |
SweScript RT II Enzyme Mix | 1 μL |
Nuclease Free Water | Add to 20 μL |
注：针对高GC或复杂模板，可预先混合RNA模板、逆转录引物、无核酸酶水并在65℃保温5 min后，迅速置冰上冷却。然后再加入其他反应组分。
(2) 轻轻混匀并离心；
(3) 逆转录程序设置：
Temperature | Time |
25℃a | 5 min |
55℃b | 5-15 min |
85℃ | 5 s |
a：如选择使用Random Hexamer Primer，25℃孵育5 min后，再进行后续反应；如选择使用Oligo (dT)18 Primer或Gene Specific Primer，可直接进行55℃反应；
b:对于高GC或复杂模板，可将逆转录温度提高至65℃。
注意事项
1. 操作时请佩戴一次性手套，避免RNase污染。
2. 逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
3. 如模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 Primer，与真核生物mRNA的3' Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
4. 原核生物RNA逆转录请选用Random Hexamer Primer或Gene Specific Primer。
5. Random Hexamer Primer适用性较广，适用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。
6. 如逆转录后续为qYCR实验，可将Oligo (dT)18 Primer与Random Hexamer Primer混合使用，可使mRNA的各个区域cDNA合成效率相同，有助于提高定量结果的真实性和重复性。
7. 如后续qYCR引物跨外显子设计，基因组去除步骤可省略。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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