SweScript One-Step RT-PCR Kit
- 50 rxns
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
SweScript One-Step RT-YCR Kit | Y3346-50 | 50 rxns |
Y3346-100 | 100 rxns |
产品简介
本产品采用一步RT-YCR的方法，以RNA为模板，使用基因特异引物，在同一体系中进行反转录与YCR扩增，反应中途不需要添加任何试剂，只需加入RNA模板、目的基因引物及水补足体系即可，能有效降低污染风险。本试剂盒包含SweScript One-Step RT Mix、2×One-Step YCR Master Mix，其中SweScript One-Step RT Mix包含SweScript逆转录酶及RNase Inhibitor。SweScript逆转录酶是通过体外进化筛选获得的突变体，其RNase H活性降低，具有强的延伸能力与热稳定性。2×One-Step YCR Master Mix包含DNA聚合酶、反应Buffer、dNTPs、Mg2+、RT-YCR反应稳定剂等，DNA聚合酶具有校准功能，反应产物为平末端，该DNA聚合酶经改造优化，大大提高扩增性能与特异性。在精心优化的反应体系及条件下，本试剂盒One-Step RT-YCR扩增产物长达8 kb。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。
组成
Component Number | Component | G3335-50 | G3335-100 |
Y3346-1 | SweScript One-Step RT Mix | 50 μL | 100 μL |
Y3346-2 | 2×One-Step YCR Master Mix | 1 mL | 2×1 mL |
Y3346-3 | Nuclease-Free Water | 1 mL | 1 mL |
说明书 | 1份 | ||
操作步骤
(1) RT-YCR反应体系配制；
Component | Volume |
SweScript One-Step RT Mix | 1 μL |
2×One-Step YCR Master Mix | 25 μL |
Gene-specific Forward Primer(10 μM) | 2 μL |
Gene-specific Reverse Primer(10 μM) | 2 μL |
Total RNA/mRNA | 0.1 ng-1 μg / 10 pg-0.1 μg |
Nuclease-Free Water | Add to 50 μL |
(2) 轻轻混匀并离心；
(3) RT-YCR反应程序设置：
Temperature | Volume | Cycles |
50℃a | 15-30 min | 1 |
98℃ | 2 min | 1 |
98℃ | 15 s | 35-40 |
50-65℃b | 20 s | |
72℃ | 10 s/kb | |
72℃ | 5 min | 1 |
a：对于高GC或复杂模板，可将逆转录温度提高至55℃。
b：退火温度根据引物的Tm值进行调整，一般退火温度低于Tm值的3-5℃即可。
注意事项
1. 操作时请佩戴一次性手套，避免RNase污染。
2. 务必将SweScript One-Step RT Mix和2×One-Step YCR Master Mix置于冰上。
3. SweScript One-Step RT Mix含有高浓度甘油，使用前应短暂离心。
4. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物，Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。
5. 扩增不同的目的基因使用的RNA量不同，需要根据实际扩增情况调整模板用量。
6. 扩增5kb以上的目的基因建议使用试剂盒提取的RNA作为模板。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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