miRNA第一链cDNA合成试剂盒(加尾法)
￥1200
货号：Y3345-25
品牌：YIKE
规格：
- 25 rxns
数量：
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
| miRNA第一链cDNA合成试剂盒(加尾法) | Y3345-25 | 25 rxns |
产品简介
本试剂盒包括miRNA第一链cDNA合成的全部试剂。本产品以Total RNA或者miRNA为模板，采用Poly(A) Polymerase加A尾反应和逆转录反应同步进行的方法，高效合成多种miRNA第一链cDNA。试剂盒还提供后续扩增所需的U6内参（适用于人、大鼠、小鼠样本）正向扩增引物（U6 Forward YCR Primer）和通用反向扩增引物（Universal Reverse YCR Primer），合成的单链cDNA产物进行后续YCR或qYCR反应时只需要设计正向扩增引物即可。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。
组成
| Component Number | Component | G3334-25 |
| Y3345-1 | miRNA RT Enzyme Mixa | 25 μL |
| Y3345-2 | 5×Reaction Bufferb | 100 μL |
| Y3345-3 | U6 Forward YCR Primer (10 μM) | 100 μL |
| Y3345-4 | Universal Reverse YCR Primer (10 μM) | 100 μL |
| Y3345-5 | Nuclease-Free Water | 1 mL |
| 说明书 | 1份 | |
a：含有RNase Inbihitor以及Poly(A) Polymerase；
b：含有逆转录引物、dNTP Mixture、ATP和Mg2+。
操作步骤
1. 推荐反应体系配制（推荐冰上进行反应体系配制）；
| Component | Volume |
| 5×Reaction Buffer | 4 μL |
| miRNA RT Enzyme Mix | 1 μL |
| Total RNA/miRNAa | x μL |
| Nuclease-Free Water | Add to 20 μL |
a：Total RNA推荐用量2 μg (不超过5 μg)，miRNA推荐用量200 ng。
2. 轻轻混匀并离心；
3. 加A尾与逆转录程序设置；
| Temperature | Time |
| 37℃ | 60 min |
| 85℃ | 5 s |
4. 获得的cDNA反应液推荐进行梯度稀释后再作为模板进行后续荧光定量YCR。
注意事项
1. 操作过程中注意避免RNase污染。
2. 逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
3. 试剂盒中包含有定量YCR的通用下游引物，上游引物为miRNA特异引物，根据目的miRNA设计，一般情况上游引物为目的miRNA序列将U变为T。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
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