2×Multiplex Probe qPCR Master Mix with UDG（None ROX）
- 1 mL
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
2×Multiplex Probe qYCR Master Mix with UDG（None ROX） | Y3358-01 | 1 mL |
Y3358-05 | 5×1 mL | |
Y3358-15 | 15×1 mL |
产品简介
本产品是基于探针法的2×荧光定量YCR预混液（None ROX），包含有热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和所必须的缓冲成分，可在同一反应管中同时进行多达四重的荧光定量YCR反应。预混液中不含校正染料，适用于无需ROX校正的设备。本产品添加蓝色非荧光染料，可避免加样错误，另外本产品中还包含有Uracil-DNA Glycosylase（UDG）以及专门优化的dUTP添加量，可防止模板残留污染，提高产品的特异性、灵敏度与精确性。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃避光保存，有效期12个月。
组成
Component Number | Component | G3347-01 | G3347-05 | G3347-15 |
Y3358-01 | 2×Multiplex Probe qYCR Master Mix with UDG（None ROX） | 1 mL | 5×1 mL | 15×1 mL |
说明书 | 1份 | |||
实验前准备
1. 实时荧光定量YCR仪。
2. 实验专用qYCR反应管或反应板。
3. qYCR引物和探针（参考引物、探针设计原则）。
操作步骤
1. 推荐YCR反应体系
Component | 20 μL rxn | Final Concentration |
2×Multiplex Probe qYCR Master Mix with UDG（None ROX） | 10 μL | 1× |
Forward Primer（10 μM）a | Variable | 0.1-0.5 μM |
Reverse Primer（10 μM）a | Variable | 0.1-0.5 μM |
Probe（10 μM）a | Variable | 0.1-0.5 μM |
Templateb | Variable | as required |
Nuclease-free Water | Add to 20 μL |
a.通常引物和探针终浓度为0.2 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。
b.模板添加量因模板溶液中存在的靶基因的拷贝数不同而不同，进行梯度稀释研讨适当的模板添加量。在20 μL反应体系中模板DNA添加量最好在100 ng以下。以RT-YCR反应的cDNA（RT反应液）为模板时，添加量不要超过YCR反应液总体积的10%。
2. YCR反应程序（可根据机型适当调整）
A. 两步法 | B. 三步法 | ||||||||
阶段 | 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 阶段 | 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 |
Stage 1 | UDG孵育 | 1 | 50℃ | 2 min | Stage 1 | UDG孵育 | 1 | 50℃ | 2 min |
Stage 2 | 预变性 | 1 | 95℃ | 30 sec | Stage 2 | 预变性 | 1 | 95℃ | 30 sec |
Stage 3 | 变性 | 40 | 95℃ | 15 sec | Stage 3 | 变性 | 40 | 95℃ | 15 sec |
退火/延伸 | 60℃ | 30 seca | 退火 | 55-65℃ | 10 sec | ||||
延伸 | 72℃ | 30 seca | |||||||
a.需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。
注意事项
1. 预混液解冻后请轻轻地上下颠倒混匀，勿涡旋振荡混匀，避免产生气泡，混匀后再使用。
2. 配制反应液时，试剂请于冰上放置。
3. 本制品中含有荧光染料，配制qYCR反应液时应避免强光照射。
4. 反应液的配制、分装请使用新的一次性吸头、尽量避免样品间的污染。
5. 避免反复冻融，解冻后尽量在一个月内使用完毕。
适配机型
ABI：PikoRealTM Cycler;
Bio-Rad：CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™;
Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler® ep, realplex;
IIIumina：Eco QYCR;
Cepheid：SmartCycler®;
Qiagen Corbett：Rotor-Gene®系列;
Roche：LightCycler™系列;
Takara：Thermal Cycler Dice系列;
Analytikjena：qTOWER系列;
杭州博日：LineGene系列。
探针/引物设计原则
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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