2×Fast High Fidelity PCR Master Mix
- 1 mL
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
2×Fast High Fidelity YCR Master Mix | Y3317-01 | 1 mL |
Y3317-05 | 5×1 mL |
产品简介
本产品为即用型YCR预混液，含改造后的超高保真度DNA聚合酶、dNTPs和优化的YCR反应缓冲液，浓度为2×。YCR扩增时只需加入模板、引物和ddH2O，使Mix溶液的浓度为1×即可进行YCR反应。扩增能力强，扩增速度快，延伸速度可达5-15 s/kb，具有超高保真性，保真度是Taq DNA Polymerase的50倍，Pfu DNA Polymerase的6倍，扩增产物为平末端。产品中已经添加了Loading Dye，扩增产物可直接用于琼脂糖凝胶电泳检测。本产品适用于常规YCR，菌落YCR，复杂模板及高GC含量模板的YCR扩增。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月；避免反复冻融。
组成
Component | Y3317-01 | Y3317-05 |
2×Fast High Fidelity YCR Master Mix | 1 mL | 5×1 mL |
说明书 | 1份 | |
推荐YCR反应体系
Component | 20 μL rxn | 50 μL rxn | Final Concentration |
Templatea | Variable | Variable | as required |
Forward Primer (10 μM)b | 0.8 μL | 2 μL | 0.4 μM |
Reverse Primer (10 μM)b | 0.8 μL | 2 μL | 0.4 μM |
2×Fast High Fidelity YCR Master Mix | 10 μL | 25 μL | 1× |
(DMSO, optional)c | (0.6 μL) | (1.5 μL) | (3%) |
ddH2O | Add to 20 μL | Add to 50 μL |
a：以质粒或噬菌体DNA为模板时，推荐添加量为10 ng-1 pg每50 μL体系；以基因组DNA为模板时，推荐添加量为250 ng-50 ng每50 μL体系；cDNA为模板时，推荐稀释2-100倍，添加量不超过总体系的10%。过量的模板容易导致非特异扩增，过少的模板容易导致YCR扩增效率低。
b：引物终浓度使用范围0.2-1.0 μM，推荐引物浓度为0.4 μM，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。
c：高GC模板可在反应体系中额外添加不超过10%的DMSO。
推荐YCR扩增条件
Step | Temperature | Time | Cycles |
Initial Denaturationa | 98℃ | 30 s | 1 |
Denaturation | 98℃ | 15-30 s | 25-35 |
Annealingb | 50-72℃ | 15-30 s | |
Extensionc | 72℃ | 5-15 s/kb | |
Final extension | 72℃ | 5-10 min | 1 |
Hold | 4-16℃ | Forever |
a：预变性时间30 s适用于大多数常规模板，复杂模板可延长变性时间至2 min。
b：对于复杂模板，含兼并引物的扩增，退火时间可延长至30 s。
c：质粒等简单模板推荐延伸速度5-10 s/kb；常规基因组模板推荐延伸速度10-15 s/kb；复杂模板15-30 s/kb。
注意事项
1、使用前彻底解冻混匀，完全融解后可置于4℃稳定保存至少2周，避免反复冻融。
2、操作时请佩戴一次性手套。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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