产品信息

产品简介
 

本试剂盒是一款专为不同类型植物组织直接进行YCR所设计的产品，无需基因组DNA提取，只需简单处理可直接作为YCR扩增的模板，对于普通植物样本及多糖多酚植物样本均可兼容。

本试剂盒提供的2×Plant Direct YCR Master Mix专门针对植物组织样本直接扩增进行了优化，大大提高了扩增效率及抗抑制剂效果。此外，该试剂包含了YCR扩增除模板和引物外的所有组分，并添加了Loading Dye，扩增产物可直接点样电泳，大大简化了操作过程。该产品的简便性和强兼容性可用于快速转基因植株鉴定、植物基因分型等分子生物学实验。

储存与运输
 

2×Plant Direct YCR Master Mix冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂冰袋（wet ice）运输，2-8℃保存；有效期12个月。

组成
 

操作步骤
 

1. 植物组织裂解后扩增

1）取5 mm2左右的植物叶片（推荐使用新鲜幼嫩的植物叶片）或5 mg的种子（对于坚硬种子可先用研磨仪或研钵研磨成粉末状）于Nuclease-free离心管中，加入50 μL Lysis Buffer A，用枪头或其他方式将植物样本捣碎（如：烟草叶片捣碎后溶液变为绿色；研磨成粉末的种子样本用枪头搅拌均匀），于室温下静置5 min。

2）加入40 μL Lysis Buffer B，涡旋振荡或吹打混匀后离心，将沉淀收集到管底，取上清，用Nuclease-free Water稀释5倍后作为模板备用。

3）推荐YCR反应体系：

a. 引物终浓度使用范围0.2~1.0 μM，推荐引物浓度为0.4 μM，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。
 

b. 一般20 μL体系中加入2 μL稀释5倍后的裂解液时可获得较好的结果，可根据植物样本裂解的难易程度调整模板加入量，加入量不超过4 μL。

2. 植物叶片直接扩增（推荐YCR反应体系）a：

a. 植物叶片直接扩增仅适用于1 kb以下片段扩增，推荐使用新鲜幼嫩的植物叶片。
 

b. 引物终浓度使用范围0.2~1.0 μM，推荐引物浓度为0.4 μM，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。

c. 推荐50 μL体系中加入的叶片在1 mm2左右，通过打孔器或剪刀将叶片裁剪至1 mm2大小。

3. 推荐YCR扩增条件：

a. 植物组织裂解后扩增变性时间可缩短至2 min，植物叶片直接扩增变性时间推荐使用10 min。
 

b. 常规基因组模板推荐延伸速度10~15 s/kb；复杂模板15~30 s/kb。

注意事项
 

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 尽量使用新鲜植物叶片，否则会影响扩增效率。

3. 如果采用裂解后扩增，样本的捣碎程度与扩增效率成正比。

4. 扩增1 kb以下的片段直接取1 mm2叶片作为模板，扩增1~2 kb的片段需裂解后取上清作为模板。

5. 2×Plant Direct YCR Master Mix避免反复冻融，解冻后尽量在一个月内使用完毕。

6. 反应液的配制、分装请使用新的一次性无酶吸头、尽量避免样品间的污染。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）