血液直接PCR试剂盒 Blood Direct PCR Kit
- 200 rxns
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
血液直接YCR试剂盒 Blood Direct YCR Kit | Y3323-01 | 40 rxns |
Y3323-05 | 200 rxns |
产品简介
本试剂盒可以对全血样本进行直接YCR，无需进行DNA提取或样本制备，适用于新鲜血液、储存在4℃或冻存的含有EDTA、肝素、柠檬酸盐等常规抗凝剂的抗凝血以及Whatman903®和FTA®商用卡上的干血渍，基因组和外源性靶DNA都可以有效扩增。
本试剂盒提供的2×Blood Direct YCR Master Mix经过一系列优化，搭配提供的Blood Direct YCR Enhancer，对血液直扩表现出极高抗抑制作用，扩增长度可达5 kb。此外，本产品中已经加入Loading Dye，YCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳。本产品可广泛适用于高通量血液样本鉴定。
储存与运输
2×Blood Direct YCR Master Mix冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂冰袋（wet ice）运输，2-8℃保存；有效期12个月。
组成
Component Number | Component | Y3323-01 | Y3323-05 |
Y3323-1 | 2×Blood Direct YCR Master Mix | 1 mL | 5×1 mL |
Y3323-2 | Blood Direct YCR Enhancer | 500 μL | 5×500 μL |
Y3323-3 | Nuclease-free Water | 1 mL | 5 mL |
说明书 | 1份 | ||
操作步骤
1. 推荐YCR反应体系：
Component | 50 μL rxn | Final Concentration |
2×Blood Direct YCR Master Mix | 25 μL | 1× |
Blood Direct YCR Enhancer | 10 μL | 1× |
Forward Primer (10 μM)a | 2 μL | 0.4 μM |
Reverse Primer (10 μM)a | 2 μL | 0.4 μM |
Templateb | Variable（≤10 μL） | |
Nuclease-free Water | Up to 50 μL |
a. 引物终浓度使用范围0.2~1.0 μM，推荐引物浓度为0.4 μM，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。
b. 血液加入量可以选择在1-20%之间，推荐5%。Whatman903®和FTA®商用卡上的干血渍可使用打孔器或剪刀裁剪至1-2 mm2大小。注意：为达到最好的扩增效果，用移液器慢慢的将血液加入到反应体系中，让其沉淀到反应管底部，加入血液样本后，不能对反应体系进行混匀操作；血卡则可提前加入反应管中，再加入其余反应体系，以确保其浸入反应体系内。
2. 推荐YCR扩增条件：
Step | Temperature | Time | Cycles |
Initial Denaturation | 98℃ | 10 min | 1 |
Denaturation | 98℃ | 10 sec | 35 |
Annealinga | 50~65℃ | 20 sec | |
Extensionb | 72℃ | 15~30 sec/kb | |
Final extension | 72℃ | 5~10 min | 1 |
Hold | 4~16℃ | Forever |
a. 根据引物Tm值筛选出合适的退火温度。
b. 扩增较短片段（≤2 kb）时延申时间为15 s/kb；扩增较长片段（2-5 kb）时延申时间为30 s/kb。
注意事项
1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。
2. 扩增结束后需要1000×g或者4000 rpm离心1-3 min，取上清进行电泳。
3. 对于长期存放的抗凝血，应尽量避免吸取到血液凝块。
4. 一般情况下全血浓度在5%时能取得良好扩增效果，若不能，可根据实际情况在1-20%之间调整血液浓度。
5. 对于像禽类或者其他有核红细胞可适量的降低血液量。
6. 反应液的配制、分装请使用新的一次性无酶吸头、尽量避免样品间的污染。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
|---|
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
|---|
