产品信息

产品简介

本产品T7 RNA polymerase，来源于T7噬菌体由大肠杆菌重组表达，是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5′-3′RNA聚合酶。它以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游DNA互补的单链RNA。本公司T7 RNA聚合酶是由定向进化筛选到的性能更优的突变体，可以识别修饰的NTP，用于各种标记RNA的合成，适用于制备各种长度的RNA，主要用途：体外RNA合成、T7 RNA polymerase介导的生物传感器等。

来源：来源于T7噬菌体，大肠杆菌重组表达。

酶活定义：在37℃、pH 8.0条件下，1 h内使1 nmol的[³H]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量定义为一个酶活单位。

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；50 U/μL。

失活或抑制：70℃加热10 min可使T7 RNA polymerase失活。金属离子螯合剂、浓度大于150 mM 钠、钾或铵盐可以显著抑制T7 RNA polymerase的活性。

酶储存缓冲液：50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 5 mM DTT, 0.1 mg/mL BSA, 50% Glycerol, pH 8.0。

5×Reaction Buffer：200 mM Tris-HCl, 30 mM MgCl₂, 50 mM DTT, 50 mM NaCl, 10 mM spermidine, pH 7.9。

图1. 不同长度RNA转录产物电泳图

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效。

组成

操作步骤

1. RNA合成：

按上述设置反应体系，轻轻混匀后将体系于37℃孵育2 h左右。注：在反应体系中可以添加RNase Inhibitor（推荐Y3425）至1 U/μL，以防止RNase污染；在反应体系中加入热稳定的无机焦磷酸酶（推荐Y3432）可以显著提高RNA转录产量；

2. 反应完成后在体系中加入2 μL 0.5 M EDTA或将反应体系-20℃冷却以终止反应。

注意事项

1. RNA合成过程中应在无RNase的条件下进行。

2. 为了特定区域的有效转录，建议在其区域下游把模板DNA预先切成平末端或5′突出末端。

3. 5×Reaction Buffer中的亚精胺与核酸结合可能形成不溶物，建议在室温条件下配置反应体系，并最后加入模板。

4. 酶制品使用时应放在冰盒内或冰浴，使用完毕后应立即放置于-20℃保存，建议分装保存。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）