产品信息

产品简介

本试剂盒使用一种特殊配方的缓冲液，与硅胶膜对核酸可逆的吸附技术相结合，可从1-5 mL过夜培养的大肠杆菌中几乎完全去除内毒素（≤0.1 EU/μg）、蛋白等杂质，质粒DNA的得量在5-20 μg。提取的质粒可应用于酶切反应、连接反应、YCR扩增、测序、转化、转染多种细胞等生物学实验。

储存与运输

RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前准备

1. 自备无水乙醇和1.5 mL Nuclease-free的离心管。

2. 准备42℃水浴或加热模块。

3. 使用前先将RNase A全部加入Buffer P1中，并于4℃可保存6个月。

4. Buffer YW使用前加入60 mL的无水乙醇。

5. Buffer P2如出现沉淀，请于37℃水浴中加热几分钟即可恢复澄清，使用后应立即盖紧盖子，避免试剂长时间与空气接触。

6. Buffer P3使用前请于4℃预冷。

实验步骤

1. 柱平衡步骤：向HiBind DNA Mini Column中加入500 μL Buffer BL，12000 rpm室温离心1 min，弃掉废液，将HiBind DNA Mini Column重新放回Collection Tube中（平衡过的柱子最好立即使用）；

2. 取1-5 mL过夜培养菌液，12000 rpm室温离心1 min收集菌体于1.5 mL离心管中（尽量将上清全部去除）；

3. 加入250 μL Buffer P1（请先检查是否加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮菌体（务必使菌体彻底分散，否则会影响裂解，导致提取质粒的质量和纯度偏低）；

4. 加入250 μL Buffer P2立即温和的上下颠倒8-10次使菌体充分裂解（此步不可剧烈震荡，避免造成基因组DNA剪切断裂，并且应保证在5 min以内完成），此时溶液应变得清亮粘稠，如果未变得清亮可能是菌体过多，裂解不彻底，应考虑降低菌体量；

5. 加入250 μL Buffer P3（提前预冷）立即温和的上下颠倒10-12次充分混匀，溶液出现紧实凝集块，12000 rpm离心10 min，取上清于新的1.5 mL离心管中；

6. 加入75 μL Buffer ER，颠倒混匀后冰上放置10 min（期间颠倒混匀3-5次），溶液呈透明蓝色；

7. 42℃孵育5 min，溶液恢复浑浊，12000 rpm室温离心10 min（离心机温度必须恢复至室温，否则会影响分层），溶液分为上下两层（如果分层不明显，室温放置1-3 min），上层为澄清水相，下层为蓝色，小心收集上层水相至新的1.5 mL离心管中;

8. 加入0.5倍上述溶液体积的无水乙醇，上下颠倒混匀后转移到HiBind DNA Mini Column中（每次加入液体量不超过700 μL），12000 rpm室温离心1 min，弃掉Collection Tube中的废液，将HiBind DNA Mini Column重新放回Collection Tube中（溶液可进行多次过柱）；

9. 向吸附柱中加入600 μL Buffer ED，12000 rpm室温离心1 min，弃掉Collection Tube中的废液，将HiBind DNA Mini Column重新放回Collection Tube中；

10. 向HBind DNA Column中加入600 μL Buffer YW，12000 rpm室温离心1 min，弃掉Collection Tube中的废液，将HiBind DNA Mini Column重新放回Collection Tube中；

11. 重复操作步骤10；

12. 12000 rpm室温离心2 min，将HiBind DNA Mini Column置于一Nuclease-free的离心管中，开盖室温放置5 min，使乙醇彻底挥发；

13. 向HiBind DNA Mini Column的膜中间部位悬空滴加50 μL Buffer TE或Endo-free Water，室温放置2 min，12000 rpm离心2 min。如果需要增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到HiBind DNA Mini Column中，室温放置2 min后，12000 rpm离心2 min；

14. 得到的质粒DNA可于-20℃长期保存。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 如果提取的质粒为低拷贝或大于10 kb的质粒，建议适当增大菌体量，并按照比例增加Buffer P1、Buffer P2、Buffer P3的用量。

3. 洗脱质粒前应使乙醇完全挥发，避免残留的乙醇影响下游实验。

4. 可将洗脱液于60-65℃预热，并延长孵育时间，可提高洗脱效率。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）