产品信息

产品简介

本试剂盒利用超顺性磁珠可逆的结合核酸的特性以及特有的缓冲体系，可快速、高效的从100 mL过夜培养的菌液中获得600-1500 μg高纯度质粒DNA，使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于酶切反应、连接反应、YCR扩增、测序等分子生物学实验。

储存与运输

RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其他试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前准备

1. 自备磁力架。

2. 使用前先将试剂盒中提供的RNase A全部加入Buffer SP1中，可于4℃保存6个月。

3. SP2使用后，应立即盖紧盖子，避免试剂长时间与空气接触。

4. SP3使用前请于4℃预冷。

5. 使用前请向Buffer YW中加入77 mL的无水乙醇。

实验步骤

1. 取100 mL过夜培养菌液（对于低拷贝质粒建议取200 mL过夜培养菌液），10,000 rpm（~11,500×g）室温离心3 min收集菌体于50 mL离心管中（尽量将上清全部去除）；

2. 加入8 mL SP1（请先检查是否加入RNase A）使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮菌体（务必使菌体彻底分散，否则会影响裂解，导致提取质粒的质量和纯度偏低）；

3. 加入8 mL SP2立即温和的上下颠倒8-10次使菌体充分裂解（此步不可剧烈震荡，并且应保证在5 min以内完成），此时溶液应变得清亮粘稠，如果未变得清亮可能是菌体过多，再重新颠倒几次直到溶液透明；

4. 加入8 mL SP3（提前4℃预冷）立即温和的上下颠倒10-12次，溶液出现紧实凝集块，冰上放置5 min，10,000 rpm 4℃离心20 min，取上清于一Nuclease-free的50 mL离心管（客户自备）中；

5. 加入10 mL SPD，15 mL无水乙醇上下颠倒混匀，随后再加入600 μL SweMag Beads（用之前涡旋至磁珠分散均匀）上下颠倒至磁珠分散均匀，室温放置30 min，期间每隔3-5 min颠倒混匀一次；

6. 将50 mL 离心管置于磁力架上静置2 min后，将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次，使残留在管盖上的磁珠冲洗下去，继续静置，直到液体澄清，弃掉液体；

7. 将离心管从磁力架上取下，加入5 mL YW（检查是否加入无水乙醇），轻轻上下颠倒，使磁珠分散均匀，再将离心管置于磁力架上，将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次，使残留在管盖上的磁珠冲洗下去，继续静置，直到液体澄清，弃掉液体；

8. 重复第7步；

9. 将离心管盖打开，室温放置5–10 min或65℃放置3–5 min，使乙醇完全挥发（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）；

10. 移去磁力架，加入1-3 mL Buffer TE或Nuclease-free Water，用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温放置3-5 min；

11. 将离心管重新放置于磁力架上，待磁珠完全吸附，取上清于新的Nuclease-free离心管中，即得到高浓度与高纯度质粒DNA；

12. 得到的质粒DNA于-20℃保存备用。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻。

3. 磁珠易沉淀，使用前应摇匀或涡旋混匀。

4. 洗脱质粒前应使乙醇完全挥发，避免残留的乙醇影响下游实验。

5. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响DNA洗脱效率。

6. 质粒DNA若要长期保存，建议用Buffer TE洗脱。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）