产品信息

产品简介

本试剂盒通过独特包埋的磁珠与碱裂解相结合的方法选择性地吸附质粒DNA，可从1–5 mL过夜培养的菌液中提取多至20 μg的高纯度质粒DNA，适用于后续的YCR扩增、测序、体外转录、酶切反应、转化等分子生物学实验。

储存与运输

RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前准备

1. 使用前先将试剂盒中提供的RNase A全部加入Solution I中，并于4℃保存。

2. Solution II和Binding Buffer如有沉淀现象，请于65℃加热，直至沉淀消失，混匀即可使用（Solution II不宜在空气中暴露太久）。

3. Binding Buffer和Buffer YPW使用前加入指定量（见瓶身）的无水乙醇。

4. 自备磁力架和1.5 mL灭菌的离心管。

操作步骤

1. 取1-5 mL过夜培养的新鲜菌液，12,000 rpm离心1 min，收集于1.5 mL离心管中，吸弃上清；

2. 加入150 μL已混有RNase A的Solution I，使用移液器或涡旋仪彻底分散菌体；

3. 加入150 μL Solution II，温和地上下颠倒8-10次使菌体充分裂解，形成透明溶液（此步骤不宜超过5 min）；

4. 加入150 μL的4℃预冷的Neutralization Buffer，立即温和上下颠倒8–10次充分混匀（此时会出现白色沉淀），12,000 rpm离心10 min；

5. 小心吸取上清转移至新的1.5 mL灭菌的离心管中，加入450 μL Binding Buffer，上下颠倒混匀，再加入30 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需涡旋至分散均匀），温和上下颠倒数次，至磁珠分散均匀；

6. 室温放置5 min，期间使用移液器或涡旋仪混匀2-3次，至磁珠分散均匀；

7. 将离心管移至磁力架上静置30 s，直至磁珠完全吸附，将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次，使管壁残留的磁珠冲刷下来，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）；

8. 加入300 μL Buffer YPW，移开磁力架，用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀；将离心管移至磁力架上静置30 s，再将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次，使管壁残留的磁珠与盐分冲刷下来，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，请务必吸尽离心管内残留的液体）；

9. 重复操作步骤8；

10. 将离心管盖打开，室温放置5–10 min或65℃放置3–5 min，使乙醇完全挥发（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）；

11. 移去磁力架，加入50–80 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温静置3 min；

12. 将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的离心管中，即得高纯度的质粒DNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻。

3. 磁珠易沉淀，使用前应摇匀或涡旋混匀。

4. 加入磁珠前，需要将其他试剂混合均匀。

5. 洗脱质粒DNA前应使乙醇完全挥发，避免残留的乙醇影响下游实验。

6. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响质粒DNA洗脱效率。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）