广州一科生物

全国400热线：400-8252586

购物车个人中心

实验类型

10% PAGE彩色(绿色)凝胶超快速配制试剂盒

￥144

货号：Y2073-50T

品牌：YIKE

规格：

50 T

数量：

产品信息

本试剂盒提供了简单而快速的PAGE彩色(红色/绿色)凝胶配制试剂，能够同时制备下层胶（分离胶）和上层胶（浓缩胶、积成胶），用户只需准备制胶设备，即可快速制备蛋白凝胶。同时，试剂盒中上层胶溶液B中含有红色/绿色染料，使得蛋白点样孔清晰呈现，实现了加样过程的可视化，极大的提高了加样效率。该染料可在上层胶中稳定存在，不会随着电泳而迁移至下层胶，不会影响电泳和染色效果，电泳完成后也便于识别上层胶并切除，不影响后续Western Blot等实验。本试剂盒使用改良型促凝剂，凝胶配制时无需添加TEMED（有恶臭气味的有毒试剂）即可凝固。本试剂盒制备的凝胶也可用于非变性PAGE凝胶电泳。

本试剂盒可制备常规尺寸的凝胶50块，具体配制的凝胶块数量与凝胶的厚薄及大小有关。

系列产品货号及清单见下方列表。

本手册适用于彩色凝胶超快速配制试剂盒系列产品（Y2052，Y2053，Y2054，Y2055，Y2056，Y2071，Y2072，Y2073，Y2074，Y2075）。

系列产品货号

货号	凝胶浓度	上层胶颜色	可制胶数量（大约）
Y2052-50T	6%	红色	60块0.75 mm胶，或50块1.0 mm胶，或30块1.5 mm胶
Y2053-50T	8%	红色
Y2054-50T	10%	红色
Y2055-50T	12%	红色
Y2056-50T	15%	红色
Y2071-50T	6%	绿色
Y2072-50T	8%	绿色
Y2073-50T	10%	绿色
Y2074-50T	12%	绿色
Y2075-50T	15%	绿色

各试剂盒组分

组分名称	规格
上层胶溶液A	50 mL
上层胶溶液B（红色或者绿色）	50 mL
下层胶溶液A	125 mL
下层胶溶液B	125 mL
改良型促凝剂	1 mL×5
说明书	1份

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；改良型促凝剂-20℃保存，开封后于4℃保存，有效期3个月；其他2-8℃避光保存，有效期12个月。

操作步骤

1. 根据目的蛋白分子量大小选择合适浓度的PAGE下层胶（分离胶），参照表格如下：

PAGE分离胶浓度	最佳分离范围（kDa）（Tris-Glycine电泳缓冲液，Y2029）	最佳分离范围（kDa）（YWE快速高分辨电泳缓冲液，Y2092）
6%	50-300	15-300
8%	30-130	10-250
10%	20-100	10-150
12%	10-60	8-100
15%	<40	<60

2. 根据实验需求，等比例混合溶液A和B，加入适量的改良型促凝剂，分别配制下层胶溶液、上层胶溶液。不同规格以及不同厚度的玻璃板可以等比例调整上层胶和下层胶溶液的配制体积，以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板为例，推荐配制体系如下表格：

配制组别	组分	0.75 mm玻璃板	1.0 mm玻璃板	1.5 mm玻璃板
下层胶溶液	下层胶溶液A	2 mL	2.5 mL	4 mL
	下层胶溶液B	2 mL	2.5 mL	4 mL
	改良型促凝剂	24 μL	30 μL	48 μL
上层胶溶液	上层胶溶液A	1 mL	1 mL	1.5 mL
	上层胶溶液B(红或绿色)	1 mL	1 mL	1.5 mL
	改良型促凝剂	12 μL	12 μL	18 μL

3. 装配好凝胶制具，先加入配制好的下层胶溶液，然后使用蒸馏水或乙醇等溶液封住下层胶液面，待下层胶凝固充分（约15-30 min）后，弃去水或者乙醇，并用滤纸吸干残留的水或者乙醇，再加入配制好的上层胶溶液，插入梳子，待其凝固（约15-30 min）后即可使用；也可在加入配制好的下层胶溶液后立即缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液，插入梳子，待其凝固（约15-30 min）后即可使用；

4. 配制完成的凝胶如不能当天使用，可2-8℃保存1-2天。

5. 推荐电泳条件：

a. 使用YWE快速高分辨电泳缓冲液（Y2092）进行电泳：200-250 V，25-35 min；

b. 使用Tris-Glycine电泳缓冲液（Y2029）进行电泳：上层胶90 V，约30 min（marker进入分离胶）；下层胶150-180 V，约60-90 min(可根据实际情况调整)。

注意事项

1. 温差过大制胶过程产热可能会产生气泡，建议将A、B预混液配好后恢复至室温，再加改良型促凝剂进行灌胶，可有效避免凝胶过程中细小气泡的形成。

2. 改良型促凝剂相较于过硫酸铵（AP）稳定性更好，使用时拿出一支，使用结束后于4℃保存，以便后续常规使用，可保存三个月；若长期不用请放置于-20℃保存，避免反复冻融。

3. 上层胶溶液B长时间静置容易产生絮状沉淀，使用前请轻轻颠倒混匀。

4. 预混液中存在单体丙烯酰胺，对人体有害，操作时请注意做好防护措施。

5. 为了保证样本同时进入分离胶，直接灌制上层胶时需缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液。

6. 加入改良型促凝剂之后尽快灌制凝胶，请勿长时间放置。

7. 温度对于胶的凝固时间影响较大，为保证实验顺利进行，一般温度越低，凝固时间越长，可适当增加改良型促凝剂用量；温度越高凝胶越快，可适当减少改良型促凝剂用量。