细胞浆与细胞核蛋白分离提取试剂盒，可以在70-90min内分离提取细胞和新鲜组织中，细胞浆蛋白、核蛋白。后续通过WB，EMSA等实验，研究不同组分在细胞中的定位。

搭配一科研磨仪 低温型（YWE-FP）+高速低温离心机（YLX-1024F），以及Cocktail（Y2017-250UL）+PMSF（Y2019-1ML）+磷酸酶抑制剂（Y2018-1ML）蛋白酶抑制剂，蛋白提取效果更好，WB实验结果好

产品信息

产品简介

本产品适用于细胞浆蛋白与核蛋白的分离提取，可用于研究不同组分在细胞中的定位。分离蛋白可用于后续SDS-PAGE，WB，EMSA等实验。

本试剂盒提供了一种简单，方便，快速的浆/核蛋白分类提取方法。能够在70-90min内完成细胞浆蛋白/核蛋白的分类提取。

本产品使用低渗溶液细胞浆蛋白抽提试剂溶胀及裂解细胞，离心即可获得细胞浆蛋白，后使用核蛋白抽提试剂A和B充分抽提细胞核蛋白。抽提获得的浆蛋白及核蛋白可以应用于SDS-PAGE，WB及EMSA等后续实验。

储存与运输

干冰（dry ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。

组成

操作说明

1. 对于细胞：

1.1. 使用前将本产品室温解冻、复温后放置于冰上；

1.2. 根据使用体积配制工作液：

    1.2.1.细胞浆蛋白抽提工作液：使用前在细胞浆蛋白抽提试剂（Y3752-1）中加入Cocktail（Y2017-250UL），PMSF（Y2019-1ML）至终浓度为1mM。临用前添加避免失效。

    1.2.2.细胞核蛋白抽提工作液：使用前在细胞核蛋白抽提试剂A（Y3752-2）加入Cocktail（Y2017-250UL），PMSF（Y2019-1ML）至终浓度为1mM以及2%体积的细胞核蛋白抽提试剂B（Y3752-3）。临用前添加避免失效。

1.3. 细胞溶胀及裂解：根据细胞沉淀量添加细胞浆蛋白抽提工作液，于4℃重悬细胞，裂解10min。裂解过程中涡旋2-3次。裂解液使用体积根据细胞沉淀体积确定，推荐10μl细胞沉淀加入100μl裂解液。例如10^{^6}总量的Hela沉淀量约为10μl，即加入细胞浆蛋白抽提工作液100μl进行裂解。

1.4. 4℃，2000g，5min条件下离心收集上清。吸尽上清，减少浆蛋白在核蛋白提取中的污染。

1.5. 对步骤1.4的上清在12000g，4℃，5min条件下离心再次收集上清即为浆蛋白。

1.6. 细胞核提取：向步骤1.4收集的沉淀中加入50-100μl细胞核蛋白抽提工作液。涡旋重悬，于4℃抽提20min，期间每3-4min涡旋10-15s。

1.7. 12000g，4℃，10min离心收集上清即为核蛋白。

2. 对于新鲜或冻存组织：

2.1. 使用前将本产品室温解冻、复温后放置于冰上；

2.2. 根据使用体积配制工作液：

2.2.1. 细胞浆蛋白抽提工作液：使用前在细胞浆蛋白抽提试剂加入Cocktail，PMSF至终浓度为1mM。临用前添加避免失效。

2.2.2. 细胞核蛋白抽提工作液：使用前在细胞核蛋白抽提试剂A加入Cocktail，PMSF至终浓度为1mM以及2%体积的细胞核蛋白抽提试剂B。临用前添加避免失效。

2.3. 把组织尽可能切成细小的碎片，使用预冷PBS清洗1-2次。每50mg组织加入1 mL细胞浆蛋白抽提工作液，使用预冷玻璃匀浆器或低温组织研磨仪充分匀浆。玻璃匀浆器研磨30-60次，研磨仪设置参数60hz，30s，2次。研磨次数及研磨仪参数可根据组织类型进行调整。

2.4. 于4℃，2000g离心5分钟。收集上清。吸尽上清，减少浆蛋白在核蛋白提取中的污染
对上述步骤的上清在12000g，4℃，5min条件下离心再次收集上清即为浆蛋白。

2.5. 细胞核提取：向步骤2.4收集的沉淀加入50-100μl细胞核蛋白抽提工作液。涡旋重悬，于4℃裂解提取20min，每3-4min涡旋10-15s。

2.6. 12000g，4℃，10min离心收集上清即为核蛋白。

注意事项

1. 试剂-20℃保存，使用前室温解冻后需马上冰浴预冷。

2. 根据实验需求可在蛋白提取试剂中加入磷酸酶抑制剂。

3. 核蛋白抽提时尽量重悬沉淀以获得更好的抽提效果。

4. PMSF临用前添加，避免失效。

5. 本产品适用于新鲜或冻存组织，但冻存组织的分离提取效果会变差。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）