细胞浆与细胞膜蛋白分离提取试剂盒，可以在60min内分离提取细胞和新鲜组织中高纯度的细胞浆蛋白和膜蛋白，后续通过WB，EMSA等实验研究不同组分在细胞中的定位。搭配一科研磨仪 低温型（YWE-FP）+高速低温离心机（YLX-1024F），以及Cocktail（Y2017）+PMSF（Y2019）+磷酸酶抑制剂（Y2018），蛋白提取效果更好，WB实验结果好

产品信息

产品简介

本产品提供了一种简单、方便的浆、膜蛋白分离提取方法（适用于细胞及组织的细胞浆与细胞膜蛋白的分离提取），能够在60 min以内完成。可使用同一样本分别提取获得不同组分蛋白。用于研究不同组分在细胞中的定位。分离获得的蛋白可用于SDS-PAGE，WB及活性检测等后续实验。

本产品使用特异性浆蛋白抽提试剂裂解细胞，离心即可获得细胞浆蛋白。获得的沉淀使用膜蛋白抽提试剂溶解获得所有膜组分蛋白（包含细胞膜、内质网、线粒体等细胞器的膜蛋白）。

储存与运输

干冰（dry ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。

组成

操作步骤

1. 对于细胞：

1.1. 使用前将本产品室温解冻后冰浴放置；

1.2. 根据使用体积配制工作液：

1.2.1. 细胞浆蛋白抽提工作液：在细胞浆蛋白抽提试剂Y2291-1中添加50×Cocktail（Y2017-250UL）至1×，PMSF（Y2019-1 mL）至1 mM，临用前添加避免失效。

1.2.2. 细胞膜蛋白抽提工作液：在细胞膜蛋白抽提试剂Y2291-2中添加50×Cocktail（Y2017-250UL)至1×，PMSF（Y2019-1 mL）至1 mM，临用前添加避免失效。

1.3. 细胞裂解：根据细胞总量添加细胞浆蛋白抽提工作液，建议5×10⁶总量细胞加入300 μL（不同细胞大小不一，建议根据细胞沉淀量添加细胞浆蛋白抽提工作液，每10 μL细胞沉淀加100 μL细胞浆蛋白抽提工作液，例如10⁶总量的Hela沉淀量约为10 μL，加入细胞浆蛋白抽提工作液100 μL）。重悬细胞，于4℃裂解10 min。裂解过程中涡旋2-3次。

1.4. 12000 g，4℃条件下离心5 min，收集上清即为胞浆蛋白。

1.5. 膜蛋白提取：使用1 mL预冷PBS对步骤1.4的沉淀进行涡旋重悬清洗，洗涤后于12000 g，4℃条件下离心5 min，弃去上清，尽量吸尽上清以防止浆蛋白污染。每管加入200 μL 细胞膜蛋白抽提工作液，重悬沉淀，于4℃裂解10 min。裂解过程中涡旋2-3次。

1.6. 在12000 g，4℃条件下离心5 min，收集上清即为胞膜蛋白。

2. 对于新鲜或冻存组织

2.1. 使用前将本产品室温解冻后冰浴放置。

2.2. 根据使用体积配制工作液：

2.2.1. 细胞浆蛋白抽提工作液：在细胞浆蛋白抽提试剂Y2291-1中添加50×Cocktail（Y2017-250UL)至1×，PMSF（Y2019-1 mL）至1 mM，临用前添加避免失效。

2.2.2. 细胞膜蛋白抽提工作液：在细胞膜蛋白抽提试剂Y2291-2中添加50×Cocktail（Y2017-250UL)至1×，PMSF（Y2019-1 mL）至1 mM，临用前添加避免失效。

2.3. 把组织尽可能切成细小的碎片，使用预冷PBS清洗1-2次。每20 mg组织加入300 μL细胞浆蛋白抽提工作液，使用低温组织研磨仪充分匀浆。研磨仪（YWE-FP）设置参数60 Hz，30 s，2次。

2.4. 12000 g，4℃条件下离心5 min，收集上清，即为胞浆蛋白。

2.5. 膜蛋白提取：使用预冷PBS对2.4沉淀进行涡旋重悬清洗，洗涤后于12000 g，4℃条件下离心5 min，弃去上清，尽量吸尽液体以防止蛋白污染。每管加入200 μL 细胞膜蛋白抽提工作液，重悬组织沉淀，于4℃孵育10 min。孵育过程中涡旋2-3次。

2.6. 12000 g，4℃条件下离心5 min，收集上清即为胞膜蛋白。

注意事项

1. 试剂-20℃保存，使用前室温解冻后需马上冰浴预冷。

2. 本实验全程需在低温环境下进行。

3. 膜蛋白在高温煮沸时，容易发生聚集现象，形成二聚体或多聚体。对于跨膜蛋白，参考的变性温度是50-70℃，15 min或者37℃，30 min。

4. 根据实验需求可在蛋白提取试剂中加入磷酸酶抑制剂。

5. 沉淀需充分重悬以获得更好的抽提效果。

6. PMSF临用前添加，避免失效。

7. 本产品适用于新鲜或冻存组织，但冻存组织的分离提取效果会变差。

8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）