产品信息

产品简介
 

本产品提供小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化形成破骨细胞的完全培养基。破骨细胞为终末分化细胞，不能传代，光镜下可观察到破骨细胞胞体较大、多核、有伪足和突起等特征。本产品可诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7形成多核破骨细胞，并表达破骨细胞标志性酶-抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP）。

储存与运输
 

常温运输；2-8℃保存，3个月有效。

组成
 

操作步骤
 

1. 生长状况良好的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7，按照10000 cells/孔的密度均匀接种于无菌48孔板中。（不同来源RAW264.7破骨分化周期及破骨分化程度有较大区别，建议使用本产品配套小鼠单核巨噬细胞RAW264.7进行实验，推荐货号Y4133，破骨周期可控制在3-5天内。）

2. 将细胞置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中，培养4-6 h或过夜后更换诱导完全培养基。

3. 取破骨诱导完全培养基37℃提前预热，小心地将48孔板待诱导孔内完全培养基吸走。向孔内缓慢加入37℃预热过的破骨诱导完全培养基500 μL，将孔板置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中开始诱导分化。（为避免培养基蒸发过快，可选择性将诱导孔周围孔内补齐无菌水或PBS。）

4. 进入分化周期后，每天观察细胞分化情况。首次加入诱导液后建议维持2天再进行换液操作，此后间隔1天进行换液，直至低倍镜下可观察到较为明显的破骨细胞。每次换液之前需预热培养基，根据细胞分化及培养基状况情况及时调整换液频率和补液体积，若细胞超过一周仍未分化出较为明显破骨形态，建议更换RAW264.7细胞来源。（使用本产品配套小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化时，第3天开始可见较为明显多核破骨细胞；第4天左右破骨细胞范围增大，第5-6天大部分破骨细胞开始碎裂。trap酶染色实验建议在出现较多破骨细胞当天立即进行，破骨细胞在完全成熟后超过24小时会逐渐破裂，细胞破裂后染色效果差。）

5. TRAP染色（选做）：分化3-5天，可观测到明显的破骨细胞，推荐使用TRAP染色试剂盒（货号Y1061）进行染色鉴定。

注意事项
 

1. 收到产品后，请及时检查外包装是否完好，是否损坏、漏液，如有请尽快联系。

2. 本产品不宜长时间放置于室温或较高温度的环境中。

3. 本产品保质期三个月，请于保质期内使用。

4. 请严格执行无菌操作，避免污染。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）