产品信息

产品描述
 

Mito-Tracker Green，是一种线粒体特异性绿色荧光探针，最大激发光波长为490 nm，最大发射波长为516 nm，可用于活细胞线粒体特异性荧光染色，也可用于染色前后固定和通透的细胞，但固定通透染色效果会略有下降。染料产生的荧光信号即使在醛固定和洗涤剂通透（推荐使用0.5% Saponin）后仍能保留在线粒体中。Mito-Tracker Green 探针可用于流式检测和荧光显微镜检测。

储存与运输
 

冰袋(Wet ice)运输；-20℃避光保存，6个月有效。

试剂盒组成

操作步骤
 

1 检测工作液配制：

1.1 本产品为50 μg粉末，实验前短暂低速离心，确保粉末沉置管底。

1.2 加入74 μL高质量无水DMSO完全溶解，配置成1 mM的储存液。

1.3 用不含血清的培养基，稀释成20 nM-200 nM的线粒体检测工作液（推荐使用100 nM）。

2 细胞染色（以下为贴壁细胞方案，悬浮细胞换液需要离心操作）：

2.1 正常或处理过后的细胞，用不含血清的培养基洗涤2-3次。

2.2 加入预热的线粒体检测工作液，37℃避光孵育30 min（不同细胞可以调整检测液的浓度和孵育时间）。

2.3 去除探针，用不含血清的培养基洗涤2-3次。

2.4 荧光显微镜用GFP通道观察或流式用FITC检测。

3 细胞固定和穿孔以及其他操作（可选）：

注意：本产品染色前后均可以进行固定、穿孔等操作，但荧光信号均会衰减；

3.1 细胞染色前固定和通透

3.1.1 正常或处理过后的细胞，加入PBS缓冲液洗涤2-3次，加入4%多聚甲醛（推荐Y1112），室温固定10 min。

3.1.2 去除固定液，用PBS缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min。

3.1.3 将固定、洗涤过后的细胞，加入0.5% Saponin，室温通透10 min。

3.1.4 去除通透液，用PBS缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min。

3.1.5 细胞经固定、穿孔处理后，可以用于染色。

3.2 细胞染色后固定通透

3.2.1 将染色、洗涤处理过后的细胞，2.5%戊二醛（推荐G1102），室温固定10 min。

3.2.2 去除固定液，用PBS缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min。

3.2.3 将固定、洗涤过后的细胞，加入0.5% Saponin，室温通透10 min。

3.2.4 去除通透液，用PBS缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min。

3.2.5 细胞经染色后固定通透，可以用于后续多标等实验。

注意事项
 

1. 首次配置储存液后，建议分装后使用，避免反复冻融。

2. 高浓度的探针会产生假阳性和线粒体毒性，以及可能会染上其他的细胞结构。

3. 血清中的氧化酶会影响探针的活性，避免使用含有血清的试剂。

4. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

5. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！