产品信息

产品描述
 

MitoTracker Red CMXRos（线粒体红色荧光探针）是一种X-rosamine的衍生物，分子量为531.52，激发波长为578±3 nm，发射波长599±4 nm。该染料可以直接进入活细胞，并定位于线粒体上，且能够与线粒体共价结合。其特异性标记线粒体的原理为带正电荷的探针骨架，可将探针定位于带负电荷的线粒体上，而探针上的氯甲基基团可以与线粒体中的游离巯基共价结合，起到荧光标记的作用；只需简单的将其同活细胞共同孵育一定的时间，即可标记细胞线粒体，且在线粒体标记后，能够进一步经固定和穿孔等处理，用于后续多标实验。

储存与运输
 

冰袋(wet ice)运输；-20℃避光保存，12个月有效。

试剂盒组成
 

操作步骤
 

1 检测工作液配制：

1.1 注意，本产品为干粉形式，使用前需短暂高速离心，确保干粉沉至管底。自备细胞级DMSO。

1.2 配制储存液：向管内加入94μL DMSO（细胞级），吹吸混匀，使染料充分溶解，即得到浓度为1 mM的线粒体荧光染料储存液（产品标签上有分子量信息），然后离心机短暂高速离心，避免试剂挂壁损失。储存液-20℃保存，建议分装成更小规格保存，避免反复冻融。

1.3 配制检测工作液：如果是染色后直接进行检测，将储存液用生物缓冲液（Hanks、PBS）或不含血清的基础培养基，稀释成终浓度为0.1-0.25 μM的线粒体检测工作液；如果染色后需要进行固定穿孔等后续操作，将储存液用生物缓冲液（Hanks、PBS）或不含血清的基础培养基，稀释成终浓度为0.4-0.6 μM的线粒体检测工作液；

2 细胞染色（以下为贴壁细胞方案，悬浮细胞换液需要离心操作）：

2.1 将细胞种于细胞培养板或者细胞爬片上，待其汇聚至一定程度；

2.2 吸除细胞培养液，用预热的缓冲液清洗1-2次，每次3-5 min；

2.3 加入预热的线粒体检测工作液，于细胞培养箱中，37℃孵化30 min（由于细胞种类和状态不同，可以对孵化时间进行一定的调整）；

2.4 去除孵化液，用缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min；

2.5 直接或用抗荧光淬灭封片液（推荐Y1412）封片后于荧光显微镜下观察（Ex=579 nm，Em=599 nm）；

3 细胞固定和穿孔以及其他操作（可选）：

注意：本产品染色后，可以进行固定、穿孔等操作，但是固定后荧光信号会衰减。

3.1 细胞固定

3.1.1 将经线粒体荧光染料标记染色并洗涤处理过后的细胞，加入固定液（推荐Y1112），室温固定10 min；

3.1.2 去除固定液，用缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min；

3.2 细胞穿孔

3.2.1 将固定、洗涤过后的细胞，加入0.2-0.5% Triton X-100，室温穿孔10 min；

3.2.2 去除穿孔液，用缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min；

3.3 细胞经染色后固定、穿孔处理后，可以用于接下来的多标等实验。

注意事项
 

1. 由于细胞的种类和状态不同，染料的工作浓度以及孵化的时间，可以进行适当调整。

2. 该染料需要活细胞状态下，进行线粒体定位，不可先固定细胞，否则会导致定位不准的假阳性结果。可以在活细胞染色后进行固定以及后续操作。

3. 在对活细胞进行染色和洗涤时，检测工作液和洗涤缓冲液需37℃预热，染色及洗涤通过在培养箱中孵育完成，以免温差刺激影响细胞形态。

4. 为了防止荧光淬灭，整个染色过程需避光操作。

5. 探针母液需分装保存，避免反复冻融；为了避免浪费，染色工作液按需配制，现配现用。

6. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！