产品信息

产品描述
 

ER-Tracker Red (内质网红色荧光探针)是由红色荧光染料BODIPY YR和Glibenclamide 偶联而成。其化学结构中的格列本脲基团，原本是一种II型糖尿病治疗药物，可以与内质网上ATP敏感钾离子通道的磺脲类受体结合，因此可以选择性定位于内质网，用作内质网特异性荧光探针，对细胞内质网进行标记。ER tracker Red特异性较好，对活细胞内质网具有高度选择性，很少使线粒体着色，且对细胞毒性较低。本探针对活细胞染色后固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

储存与运输
 

干冰(dry ice)运输；-20℃避光保存，12个月有效。

试剂盒组成
 

操作步骤
 

1 检测工作液配制：

1.1 本产品为1 mM存储液，实验前回温至室温，短暂低速离心，确保试剂沉置管底；

1.2 将其经缓冲液（Hanks、PBS等，建议使用Hanks）或基础培养基（不含血清），稀释成0.25-1 μM的内质网检测工作液；

2 细胞染色（以下为贴壁细胞方案，悬浮细胞换液需要离心操作）：

2.1 正常或处理过后的细胞，用缓冲液洗涤1-2次，每次3-5 min；

2.2 加入预热的内质网检测工作液，于细胞培养箱中，37℃孵化20 min（由于细胞种类和状态不同，可以对孵化时间进行一定的调整）；

2.3 去除内质网检测工作液，用缓冲液洗涤2-3次，每次3-5min；

2.4 直接或用抗荧光猝灭剂（推荐G1401）封片后于荧光显微镜下观察红色荧光（Ex=587 nm，Em=615 nm）；

3 细胞固定（可选）：

注意：本产品染色后，可以进行固定，但是固定后荧光信号会衰减；不能穿孔处理，穿孔会导致荧光标记消失。

3.1 将染色、洗涤处理过后的细胞，加入固定液（推荐Y1112），室温固定5 min；

3.2 去除固定液，用缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min；

3.3 清洗后的细胞，可根据实验需要对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。

注意事项
 

1. 由于细胞的种类和状态不同，染料的工作浓度以及孵化的时间，可以进行适当调整。

2. 该探针染色后不能穿孔处理，穿孔后细胞荧光几乎完全消失。

3. 格列本脲的药理学性质可能影响内质网的某些功能；某些特殊细胞中磺脲类受体的可变表达也可能会导致非内质网特异性染色。

4. 在对活细胞进行染色和洗涤时，检测工作液和洗涤缓冲液需37℃预热，染色及洗涤通过在培养箱中孵育完成，以免温差刺激影响细胞形态。

5. 为了防止荧光淬灭，整个染色过程需避光操作。

6. 探针母液需分装保存，避免反复冻融。为了避免浪费，染色工作液按需配制，现配现用。

7. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！