一种以PKH26为荧光探针快速灵敏地标记外泌体，以用于外泌体示踪研究的试剂盒。还可用于细胞膜的标记。其激发为556 nm，发射波长为567 nm。可搭配一科Hoechst 33342（Y1138-1ML）染料标记细胞核，与细胞核共定位，效果更好，结果更直观。

产品信息
 

产品简介
 

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150nm的小囊泡，存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。外泌体携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

Exosome具有典型的脂质双分子层结构，本试剂盒是一种利用红色荧光探针PKH 26对外泌体细胞膜进行标记和示踪的试剂盒，当探针与外泌体细胞膜脂质区结合时发出红色荧光，其激发为556 nm，发射波长为567 nm。此外也可用于细胞的体外标记、增殖、示踪研究。

储存与运输
 

干冰(Dry ice)运输；-80℃保存；6个月有效

组成
 

操作步骤

一、 外泌体染色

1. 提取、纯化外泌体，推荐按照本公司的外泌体分离层析柱（Y4123、Y4124）。

2. 检测外泌体粒径、浓度，推荐使用NTA检测。

3. 将1 mL 1×1011 Particles/mL的外泌体加入1 μL PKH 26染料，混合均匀。

4. 室温孵育5 min，加入1%的BSA终止染色并吸附多余染料。

5. 再次通过外泌体分离层析柱（Y4123-5）纯化去除多余染料后可用于后续实验（染色后的外泌体可4℃存放过夜）。

二、 细胞染色（以贴壁培养的细胞为例）

1. 1×PKH 26染色液配制：取1 μL PKH 26（1000×）与1000 μL PKH 26稀释缓冲液充分混匀，配制成1×PKH 26染色液备用（PKH 26探针推荐使用浓度1×-1.5×）。

2. 正常或实验组细胞（汇合度建议50-80%），用PBS洗涤2-3次。

3. 加入1 mL 1×PKH 26染色液，室温避光孵育5 min（不同细胞孵育时间存在差异，可在5-30 min范围内调整）。

4. 加入等体积灭活的血清或1% BSA结合多余的染料，室温等待1 min。（可选）

5. 用完全培养基洗涤2-3次。

6. 可用荧光显微镜直接观察，选择DsRed通道；或重悬细胞后用流式细胞仪检测，选择PE通道（Ex/Em：556/567 nm）。

注意事项
 

1. 如每次使用的PKH 26探针较少，请视情况分装，尽量避免PKH 26探针反复冻融，-80℃避光保存。

2. PKH 26工作液应现配现用，不能提前配制，否则将影响染色效果。

3. 不同细胞标记后可以示踪的代数和时间差异较大，可根据实际情况或者参考文献进行检测。

4. PKH 26染色前不可固定和通透，染色后可用中性甲醛固定和0.5%的Saponin通透。

5. 悬浮细胞染色时，推荐细胞密度是0.8~1.5×106个/mL。

6. 本产品对光敏感，操作过程尽量避免强光接触。

7. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！