产品信息

产品描述

脂滴是细胞内专门储存脂质的细胞器，可调节细胞中性脂质的存储和水解，为细胞提供动态的能量平衡。此外，脂滴能够沿着细胞骨架运动，并与其他细胞器相互作用，在信号转导调节过程中起着重要作用。在多类代谢疾病，如肥胖、脂肪肝、心血管疾病，病理状态等中，都会发生细胞脂滴会异常积累。 

荧光法脂滴检测试剂盒，以BODIPY 493/503荧光探针为主体，该探针是一款亲脂性荧光探针，能够定位于极性脂质，可用于标定细胞、组织中性脂质含量。本试剂盒经过本司研发团队优化和调试，具有使用便捷、性能稳定、重复性好等多重优点，细胞内脂质含量越高，产生的荧光强度越强，可通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等仪器进行检测。此外，本试剂盒还额外提供油酸作为甘油三酯合成和储存的诱导剂，可用于阳性对照的诱导。

储存与运输
 

干冰运输；-20℃避光保存，6个月有效。

试剂盒组成
 

注意：上述反应次数为6孔板体系检测。
 

操作步骤

注意：以6孔板贴壁细胞为例，悬浮细胞需要每次换液进行离心操作；组织样品直接参考染色标记步骤，整体试剂使用体积视情况进行调整；如有需要，可提前对样品进行固定处理，但是请避免对样品进行穿孔处理。

1. 脂滴检测工作液以及脂滴诱导工作液配制：

1.1. 取适量脂滴检测探针（2 mM）与脂滴检测缓冲液，以1 : 500-2000比例充分混合，配制成脂滴检测工作液备用。

1.2. 取适量阳性诱导剂（500 mM），使用对应检测细胞的细胞培养基稀释到400-1000 μM，配制成脂滴诱导工作液备用（此浓度为参考范围，可根据细胞性质或其他情况适当调整）

2. 阳性对照组以及药物等处理（6孔板贴壁细胞为例，悬浮细胞每次换液，需进行离心操作）：

2.1. 细胞根据需要，提前种植于6孔板中（可根据检测方式和设备选择爬片或不爬片）。

2.2. 去除原有细胞培养基，使用PBS或其他缓冲液洗涤2次：

2.2.1. 实验组：对待测细胞进行药物刺激或其他相关处理，根据实验设置所需孵育时间。

2.2.2. 阳性对照组：添加1 mL 脂滴诱导工作液于孔板中，将其置于培养箱中过夜孵育。

2.3. 孵育结束后，转步骤3进行染色标记。

3. 脂滴染色标记：

3.1. 将细胞原培养基去除，使用PBS或其他缓冲液洗涤2-3次。

3.2. 去除洗涤缓冲液，添加1 mL 脂滴检测工作液，轻晃混匀。

3.3. 避光于CO2培养箱中避光孵育15 min。

3.4. 孵育结束后，使用PBS或其他缓冲液洗涤2次，即可根据实验需要对其进行进一步的染核等操作或使用相应设备进行检测，建议1 h内进行检测。

4. 脂滴检测：

4.1. 将3.4中孵育洗涤后的样品，使用相应的方式和仪器进行分析，标记后显示为绿色荧光，EX/EM 493/503 nm，以下举例部分仪器检测的方式：

4.1.1. 直接或用抗荧光淬灭封片液（货号：Y1412）封片后置于荧光显微镜下进行检测分析。

4.1.2. 使用胰酶消化液进行消化重悬后（悬浮细胞不用），使用流式细胞仪对细胞进行检测分析。

注意事项
 

1. 由于细胞的种类和性质不同，阳性诱导剂和探针工作浓度以及孵化的时间，可根据实验需要进行适当调整。

2. 样品需避免接触有机溶剂或其他影响脂类物质的成分，以免干扰检测的准确性。

3. 荧光染料存在淬灭问题，操作过程需注意避光。

4. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！