产品信息

产品简介

GUS基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶（β-glucuronidase，GUS），该酶是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为X-Gluc）水解，产生无色的吲哚氧基中间物，再经氧化二聚化作用形成不溶的深蓝色染料，使具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色。绝大多数植物细胞内不存在内源的GUS基因，GUS基因常作为转基因植物的报告基因，尤其广泛应用于研究外源基因瞬时表达转化实验。

储存与运输

整套试剂盒-20℃运输，Y1100-1组分-20℃避光保存与运输，其余组分2-8℃保存与运输，12个月有效期。

组成

实验前准备

配制20 mg/mL X-Gluc储备液：

将X-Gluc溶解液离心后，吸取5 mL X-Gluc溶解液加入到含有100 mg的X-Gluc管中，震荡混匀至粉末完全溶解，即配成20 mg/mL X-Gluc储备液。该储备液-20℃避光可保存 20-30天。长期保存建议分装到棕色离心管里，-80℃避光保存。

配制GUS染色工作液：

请按照以下比例，配制GUS染色工作液，建议现配现用。

GUS染色步骤

1. 取材：取新鲜或-20℃保存7d内的植物样本，放入合适大小的离心管中。

2. 染色：加入现配制的GUS染色工作液完全浸没样本，锡箔纸包好后于37℃恒温箱中避光孵育过夜（约15 h）。为排除实验操作问题需设置非转基因样本的阴性对照，和确定转有GUS基因的阳性对照样本。（可选：因植物组织内含有大量空气，为使染液更好进入组织内，可将离心管置于真空泵中抽气2 min以上。）

3. 脱色：去除GUS染色工作液，加入75%乙醇进行脱色1-3 h，至阴性对照呈透明无色。如脱色不彻底，可适当延长脱色时间。

4. 观察采图：样本保存于75%乙醇中。观察时取出样本肉眼观察微距照相机拍照，或体视显微镜下观察拍照，或水溶性封片剂压平封固后倒置或正置显微镜拍照采图。透明无色背景上的蓝色即为GUS阳性信号。

注意事项

1. 建议新鲜样本现取现染，如不能即刻进行染色可将新鲜样本置于-20℃保存7d 内进行染色。保存温度及时间不能过高过长，否则影响染色效果。

2. 配制好的X-Gluc储备液应避免反复冻融，否则染色效率会下降。

3. 配制试剂时，最好在冰上操作。配制的GUS染色工作液如果当次未用完可在2-8℃避光保存半个月，如果溶液变色则弃用。

4. 显微镜观察时，可用甘油明胶封片剂（Y1413）压平封片后观察采图。

5. 染完色采好图的组织样本可进一步做石蜡包埋切片（建议8μm），脱蜡后中性树胶封片，显微镜观察采图或组织切片全景数字扫描，进一步在显微结构下观察阳性信号及分布。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）