服务介绍：

正常的骨代谢是通过成骨细胞合成骨基质与破骨细胞吸收骨基质而维持平衡。成骨细胞的标记酶是碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）。破骨细胞的标记酶是抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）。这两种标记酶在组织切片或者培养细胞过程中，被作为成骨细胞、破骨细胞存在的标记指标。通过对这两种特异性标志酶（ALP/TRAP）的同时检出，可以分析骨相关细胞的分化及其在骨组织的分布情况。

本实验采用偶氮偶联法来显示碱性磷酸酶（ALP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色（蓝色）产物，以此证明碱性磷酸酶（ALP）的定位。在酸性条件下，抗酒石酸酸性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色（红色）产物，以此证明抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的定位。染色后，含ALP的成骨细胞呈蓝色，含TRAP的破骨细胞呈红色。

实验大体流程：

骨组织PFA（Y1112）4℃固定保存一周内（24h-48h最佳）——骨组织用我司 EDTA脱钙液（Y1116）4℃低温脱钙——冰冻切片入水——提前配制过滤的ALP染色液染色——水洗——提前配制过滤的TRAP染色液染色——水洗——甘油明胶封片。

实验结果展示：

骨组织ALP+TRAP双重染色-小鼠膝关节

结果判读：

骨组织沿骨膜内整齐排列的矮柱状成骨细胞呈蓝色，软骨处和骨小梁边缘呈蓝色，破骨细胞呈酒红色或者浅红色。

送样运输要求：

1．做ALP+TRAP双重染色的组织需要用PFA（Y1112）4℃固定，固定一周内（24h-48h最佳）进行脱钙包埋切片染色。室温固定数小时就会影响酶活，4℃固定超过一周也会影响酶活，导致阳性减弱甚至丢失。

2．做ALP+TRAP双重染色的骨组织需要使用本试剂盒中的ALP+TRAP染色试剂盒脱钙液或单独采购我司Y1116 EDTA脱钙液4℃低温脱钙。其它脱钙液脱钙的组织，不保证染色结果。用酸性脱钙液脱钙的骨组织，酶失活阳性丢失。建议在我司进行骨组织的脱钙制片和染色全套实验服务。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！