产品信息：

服务介绍：

漂片免疫荧光是用振动切片机将组织切成30μm-200μm厚的组织片，或者直径小于200μm的类器官，或厚度小于200μm的小组织如细小神经血管等组织，将组织片或小组织漂浮于试剂中进行免疫染色后，再将组织片贴附于载玻片上用抗荧光淬灭封片剂封片后进行共聚焦成像。相较于传统4μm左右的石蜡切片及8μm左右的冰冻切片免疫荧光标记，该方法最大的优势在于组织更厚，能观察到的组织结构及阳性信号更丰富，更接近于组织原本的空间结构，可以清晰、立体、多角度、多层面观察和研究目的蛋白的形态结构、定位及表达情况。

做漂片的组织切片或小组织较厚，一般的荧光显微镜或扫描仪很难清晰立体成像。需利用我司配备的徕卡STELLARIS 5超高分辨率白激光共聚焦显微镜3D成像。采用3D深层扫描，多色多焦点聚焦，3D立体清晰成像，可展示组织不同层面荧光分布情况。

实验流程：

通用型组织固定液（Y1112）灌注固定实验动物——取目的区域组织置于通用型组织固定液（Y1112）4℃后固定过夜（注意固定液切勿冷冻结冰）——无菌PBS（Y4213）洗涤5 min 3次——无菌PBS（Y4213）浸泡4℃运输尽快送样（最好3d内送样到我司实验室）——振动切片机切片（30-200μm可指定切片厚度），200μm内的类器官或小组织无需切片——免疫标记——贴片——抗荧光淬灭封片剂封片

结果展示：

小鼠脑组织，振动切片30μm，GFAP (YB11107，绿光)+NeuN (YB15149，紫光)+MBP（YB12237，红光）。

小鼠肾组织，振动切片30μm，AQP2（YB115740，绿光）+α-SMA（YB111375，红光）+GGT1（YB113432，黄光）+DAPI（蓝光）

送样运输要求：

1、组织样本：通用型组织固定液（Y1112）灌注固定实验动物，取目的区域组织置于通用型组织固定液（Y1112）4℃固定过夜（注意固定液切勿冷冻结冰），无菌PBS（Y4213）洗涤5 min 3次，无菌PBS（Y4213）浸泡4℃运输尽快送样（最好3d内送样到我司实验室）。

2、类器官收集固定流程及注意事项：直径超过200μm的类器官需做切片。

①数量要求：取6孔板中生长好的类器官，每孔200个左右类器官（可以用6、12、24孔板等培养类器官，培养完成以后将同种处理的类器官合并收集，每种处理的类器官总数目不少于200个）。注意：不要让类器官过度生长，形态小的类器官，才能更好地维持类器官的形状。

②清洗：用移液枪或巴氏吸管轻轻去除6孔板中的培养基，加入常温PBS(Y4213-500ML) 清洗两次。

③固定：去除孔板中的PBS，每孔加入2 mL 通用型组织固定液（Y1112），室温固定1 h后轻轻去除固定液。

④收集：将预冷至4℃的PBSB（1 mg BSA（YC305021）溶于100mL PBS缓冲液（Y4213）中配制而成）加入孔板内。剪去1mL吸头顶端使吸口变大(YP-1000-C)，用移液器（YPIP-1000）轻轻吹打基质胶，该操作在冰上进行，吹打至基质胶完全分离孔板底部，然后将含类器官的悬液转移至15 mL离心管中（YP-1501-J）。

⑤离心沉淀重悬：含类器官悬液的离心管放入垂直离心机中1000rpm/min离心3min，去上清，可见类器官沉淀绿豆大小。加入1.5mL无菌PBS（Y4213）将类器官轻轻重悬后转移至1.5mL离心管（YP-150X-J）。

⑥保存运输：用封口膜封闭离心管管口，用缓冲气袋包裹离心管，4℃保存运输（保存运输过程中轻拿轻放，尽快送样，最好3d内送样到我司实验室）。

3、共聚焦3D成像为选取局部视野拍照成像，送样前请填写共聚焦送样单（https://www.servicebio.cn/data-detail?id=5038&code=YPJSXXDXZ），详细标注目的拍照区域。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！