项目介绍：

免疫电镜是利用抗原抗体特异性结合原理，在一张超薄切片（镍网）上，用特异性一抗与待检测抗原结合，然后用带有胶体金标记的二抗与一抗抗原复合物结合。在电子显微镜下胶体金为黑色颗粒状物质，在组织和细胞超微结构上清楚定位抗原，实现蛋白于亚细胞水平的定位，如线粒体、内质网等。

样本准备：

将可孵育抗体的超薄切片，捞于镍网，干燥后送样。

实验步骤：

免疫标记：

①复温水合：镍网从4℃取出用超纯水悬浮5min；

②清洗：TBS室温清洗3次，每次5min；

③封闭：1%BSA/TBS的封闭液室温封闭30min；

④加一抗：抗体与封闭液按一定稀释比稀释后4℃过夜孵育；

⑤清洗：室温复温后，TBS清洗3次，每次5min；

⑥加二抗：二抗与二抗稀释液按一定稀释比稀释，先室温孵育20min，后转37℃烘箱孵育1h，然后转室温复温0.5h。实验过程中防止干片。

⑦清洗：TBS清洗5次，每次5min后，超纯水清洗5次，每次5min。

⑧铀复染：镍网于2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色8min；70%酒精清洗3次；超纯水清洗3次。

⑨烘干：清洗后的镍网用滤纸吸干后放入网板中，37℃烘箱放置10min烘干备用。

备注：

1、servicebio抗体请到官网查询antibody。如果公司无抗体，需要客户自己提供抗体。市面上抗体大多未进行免疫电镜标记验证，标记效果不确定。未标记成功收取一半费用。

2、如果客户使用本公司一抗，需额外收取一抗抗体使用费100元/张。

效果展示：（以下为标注图，最终结果无结构标注，如有需要可联系销售开具标注分析项目）

仅供科研用途，不可用于临床诊断！