服务信息：

服务介绍：

免疫组化三标（Triple Staining IHC）是在单张组织切片上通过二抗显色体系选用三种不同颜色的显色试剂同时检测显示三种蛋白。可在明场显微镜下直接呈现三种蛋白在组织微环境中的精确位置、邻近关系、浸润程度等，以分析三者间的相互关系。对珍贵或微量病理组织的研究具有显著优势。免疫组化三标相对于免疫荧光三标而言，组织结构显示更清楚。普通明场成像系统即可观察，无需借助荧光成像系统。

本mIHC免疫组化三标检测，采用DAB、BCIP/NBT和AEC三种显色剂，与HRP酶偶联物反应，DAB产生棕黄色沉淀，AEC产生红色沉淀；与AP酶偶联物反应，BCIP/NBT产生蓝紫色沉淀，为方便阳性结果判读，不能用苏木素复染蓝色细胞核，三种显色结果颜色对比鲜明，易于观察。适用于石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、细胞涂片等组织或细胞样本的免疫组化双重染色。

实验流程：

以石蜡组织切片为例：

石蜡切片脱蜡至水——抗原修复——画圈双氧水封闭——血清封闭——孵育第一种一抗——孵育HRP二抗——DAB显色——抗体洗脱——血清封闭——孵育第二种一抗——孵育AP二抗——BCIP/NBT显色——抗体洗脱——血清封闭——孵育第三种一抗——孵育HRP二抗——AEC显色——水性封片剂（Y1413）封片——镜检图像采集（推荐切片白光扫描YDP2212）

实验结果展示：

Mouse 肾

α-SMA(YB111375) DAB棕黄色+ Calbimdin(YB111222) BCIP/NBT蓝紫色+ Nestin(YB155696) AEC红色

100× 

Mouse 肾

calbindin(YB111222)DAB棕黄色+LRP2(YB112120)BCIP/NBT蓝紫色+Nestin(YB155696) AEC红色

15× 

Rat 脑

GFAP(YB11107) DAB棕黄色+ NEUN(YB11149) BCIP/NBT蓝紫色+ MBP(YB12238) AEC红色

15×

Rat 脾

PCNA(YB12021) DAB棕黄色+ CD3(YB151148) BCIP/NBT蓝紫色+HO-1(YB15115) AEC红色

15×

结果判读：

DAB显色结果为棕黄色，BCIP/NBT显色结果为蓝紫色，AEC显色结果为红色。

送样运输要求：

1、组织样品固定石蜡切片：实验动物处死后，用锋利的手术器械立即取厚度为1cm以内的新鲜组织样品（推荐YB-2取材手柄搭配病理级窄刀片进行取材）。取材时注意避免挤压挫伤需观察的目的区域组织。组织取材后即刻投入10-20倍体积相应的固定液内固定（如Y1112通用型组织固定液；Y1120FAS眼球固定液；Y1132动物睾丸组织固定液；Y1122环保型GD肌肉固定液；Y1130脂肪专用固定液；Y1141神经组织固定液等）。室温固定保存运输，切勿冷冻结冰，尽快脱水石蜡包埋切片。

2、新鲜肌肉组织冰冻切片：取厚度为1cm以内的新鲜肌肉组织，将组织周围结缔组织小心剔除干净后浸没于10-20倍体积的新鲜肌肉组织保存液中（Y3092），2-8℃放置2h后转入-80℃冰箱保存，干冰运输，避免反复冻融。

3、其他新鲜组织冰冻切片：实验动物不灌注，处死后，取新鲜组织用纱布或滤纸吸干表面水份，放在较大体积的YP管内避免样本挤压（不要用锡纸包裹以防样本挤压变形），液氮速冻15s，转-80°冰箱保存，干冰运输，全程避免组织冻融。

4、冰冻切片：冰冻切片-20℃保存运输。

5、石蜡切片：石蜡切片常温保存运输。

6、细胞爬片：细胞爬片加固定液（Y1112）固定30min后，换无菌PBS(Y4213)，密封，4℃运输。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！